药敏室和消毒检测室的同事常互相问:你们用的金黄色葡萄球菌是什么编号?一个说 25923,一个说 6538,两边都觉得自己没错。其实都没错——这本来就是两条轨道上的菌株,用对地方都对,换着用就出问题。这篇文章把三个编号的定位和用法讲清楚,看完就知道自己该订哪支。
一、三株菌的定位完全不同
先把结论放这儿:ATCC 6538 是"产品评价菌",ATCC 25923/29213 是"药敏质控菌"。三株菌分属两条不同的应用轨道,不能混用。
| 维度 |
ATCC 6538 |
ATCC 25923 |
ATCC 29213 |
| 别名/出处 |
FDA 209,1937年入ATCC |
药敏纸片法质控经典株 |
药敏稀释法质控经典株 |
| β-内酰胺酶 |
阴性(ATCC确认) |
不产酶(敏感株) |
产酶(产β-内酰胺酶) |
| 青霉素敏感性 |
敏感 |
敏感 |
敏感(但产酶,用于验证复合制剂) |
| 核心应用 |
消毒剂/抗菌材料/药典微生物限度检测 |
K-B纸片扩散法药敏质控 |
肉汤/琼脂稀释法(MIC)药敏质控 |
| 依据标准 |
消毒技术规范、GB/ISO抗菌标准、USP/EP/JP |
CLSI M100 |
CLSI M100 |
| 典型配套 |
大肠杆菌8099、白色念珠菌10231 |
大肠埃希菌25922、铜绿假单胞菌27853 |
粪肠球菌29212等 |
| 生物安全等级 |
BSL-2 |
BSL-1 |
BSL-1 |
二、25923 和 29213:纸片法与稀释法,各管一摊
CLSI M100(抗菌药物敏感性试验执行标准)是国际药敏质控的权威依据,中国药典和各级耐药监测规范(如《食源性致病菌耐药监测技术规范》)都跟它衔接。M100 对金黄色葡萄球菌质控菌株的指定很明确,纸片法一套、稀释法一套。
2.1 ATCC 25923 —— K-B 纸片扩散法质控株
- 角色:葡萄球菌属纸片扩散法药敏的质控菌,抑菌圈呈"沙滩状"(边缘渐变、平坦)。
- 特性:不产 β-内酰胺酶,对青霉素敏感,用来验证纸片法试验系统(纸片、MHA 培养基、接种量、培养条件)是否在控。
- 关键操作参数:
- 菌悬液调至 0.5 麦氏浊度(约 1.5×10⁸ CFU/mL);
- 调菌后 15 分钟内完成接种;
- 纸片贴放后 35℃±2℃ 培养 16~18 小时;
- 量抑菌圈直径,和 M100 规定的质控范围比对(青霉素纸片、头孢西丁纸片都有明确区间)。
- 其他用途:革兰氏染色阳性质控、凝固酶试验阳性质控、Mueller-Hinton 琼脂批次评估、CAMP 试验等。
2.2 ATCC 29213 —— 稀释法(MIC)质控株
- 角色:肉汤稀释法/微量稀释法测最低抑菌浓度(MIC)时的质控菌,抑菌圈呈"悬崖状"(边缘锐利、陡峭)。
- 特性:产 β-内酰胺酶,这是它与 25923 最本质的区别。产酶特性让它成为验证 β-内酰胺/β-内酰胺酶抑制剂复合制剂(如阿莫西林/克拉维酸)药敏结果的必需工具。
- 关键操作参数:
- 最终测试浓度约 5×10⁵ CFU/mL;
- 判读结果是 MIC 值(μg/mL),须落在 M100 规定的质控范围内。
- 官方衔接:CLSI M100 和国内耐药监测规范都明确写着一句:纸片扩散法用 ATCC 25923 或其等效株,肉汤稀释法用 ATCC 29213 或其等效株。
2.3 混用会怎样
- 用 29213 做纸片法:产酶特性会让青霉素类抑菌圈偏小,可能误判"不达标",白白返工;
- 用 25923 做稀释法:不产酶株验证不了含酶抑制剂复合药物的 MIC 质控范围;
- 结论一句话:两株菌各管一摊,不能互换,采购时成对配备。
三、6538 为什么不参与药敏质控
得从两个角度看:
- 定位不同:6538 是"产品评价"导向的标准菌,被消毒规范、抗菌材料标准、药典微生物限度/培养基适用性试验引用,它检验的是消毒剂、抗菌材料、培养基、药品这些"产品"的效果;25923/29213 检验的是药敏试验系统本身(纸片、培养基、操作)可不可靠。质控对象不是一回事。
- 特性不匹配:药敏质控需要明确的产酶/不产酶表型来区分验证不同类别药物。6538 虽然 β-内酰胺酶阴性,但它的使用价值集中在消毒/抗菌领域,CLSI M100 也从未把它列入药敏质控株清单。
反过来也一样:消毒检测标准(WS/T 650-2019、GB 38456-2020、ISO 22196)指定的是 6538(或 6538P),配套 8099/10231/8739 等,别随手换成 25923。
四、选型逻辑,一张图记住
金黄色葡萄球菌标准菌株选型
│
├─ 评价消毒剂/抗菌产品功效? → ATCC 6538(配套8099/10231/8739)
│ 依据:消毒技术规范2002、GB 38456、WS/T 650、GB 15979、
│ GB/T 20944.3、GB 21551.2、ISO 22196、EN 1040、ASTM E1053
│
├─ 药敏试验纸片扩散法(K-B)质控? → ATCC 25923
│ 依据:CLSI M100
│
├─ 药敏试验稀释法(MIC)质控? → ATCC 29213
│ 依据:CLSI M100
│
└─ 药典微生物限度/培养基适用性/无菌检查? → ATCC 6538(USP/EP/JP/ChP)
记口诀:问"产品行不行"用 6538;问"纸片法准不准"用 25923;问"MIC 对不对"用 29213。
五、实验室管理上的几条建议
- 分开管、分开建台账:三株菌用途不同,质控计划分开列,避免因为"都是金葡"混用库存。
- 传代控制:工作菌株 -70℃ 甘油冻存,传代不超过 5 代,防止 MIC 漂移和表型改变。
- 代际更新:药敏质控菌株定期和 ATCC 原代比对,条件允许就用商品化即用型冻干产品,减少传代。
- 采购提示:三株里 ATCC 6538 属于特定出口管制类别(如 16-6A 相关清单)涉及菌株,货期和合规成本高于 25923/29213,提前备货;ISO 22196 这类指定 6538P 的标准,下单时按标准要求的形式订。
- 记录溯源:每批试验记录菌株批号(COA)、代次、传代日期,数据可追溯,这是过 CMA/CNAS 评审的硬要求。
参考资料
- CLSI M100《Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing》(现行有效版本)
- ATCC 官网 6538 / 25923 / 29213 产品说明书
- WS/T 650-2019《抗菌和抑菌效果评价方法》;GB 38456-2020;GB 15979
- ISO 22196:2011(对应 GB/T 31402-2023)
- 《中国药典》四部微生物限度检查相关通则;USP <51> 等
- 地方标准/规范:《食源性致病菌耐药监测技术规范》等耐药监测技术文件
菌株特性与标准引用均基于公开权威资料整理,具体操作以最新有效标准原文为准。