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ATCC 6633 常见问题：枯草芽孢杆菌标准菌株使用与采购答疑

发布日期：2026-09-20 17:47:56 浏览量：27

文档用途：可直接复制到产品页 / 官网 FAQ / 销售话术卡 / 客户培训材料
版本：v1.0（2026-09-20）
适用范围：ATCC 6633™ 标准菌株的销售、技术支持与售前/售后沟通
来源：ATCC 官方产品页、USP《微生物学检查》通则、中国药典（通则 1201 抗生素微生物检定法）、FDA GRAS 名单、PMC/NRRL 保藏资料

⚠️ 阅读须知：先纠正一个常见误解

ATCC 6633 不是金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），而是枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis subsp. spizizenii，新分类：Bacillus spizizenii）。

两者在物种、形态、生物安全等级、用途上完全不同：

维度	ATCC 6633	ATCC 6538（金葡）
物种	芽孢杆菌	葡萄球菌
形态	G⁺杆菌，有芽孢	G⁺球菌，无芽孢
BSL	BSL-1	BSL-2
核心用途	抗生素效价测定 / 杀孢子挑战 / 药典微生物检验	消毒剂/防腐剂/抗菌产品效果评价

如果客户要的是金葡，请推荐 ATCC 6538 / CMCC(B) 26003。
如果产品资料/模板把 6633 标成金葡，请立即修正，避免客户误购。

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项目	内容
菌株全名	Bacillus subtilis subsp. spizizenii（新分类：Bacillus spizizenii 斯氏芽孢杆菌）
ATCC 编号	ATCC 6633™，别名 NRS 231（NRRL 保藏号）
其他保藏号	NCTC 10400、DSM 347、WDCM 00003、CCM 2216、IFO/NBRC 13721 等
中国药典对应株	CMCC(B) 63501（同源对应，药典检验可互换）
来源	由 N. R. Smith 保藏，长期作为抗生素效价测定标准株
生物安全等级	BSL-1（非致病性，FDA/EMA 认可 GRAS）
形态	G⁺杆菌，周生鞭毛可运动，内生芽孢（中央/近端，不膨大菌体）
培养条件	TSA / TSB / MH，30 °C 最适（不要默认用 37 °C），需氧，24–48 h
关键产物	subtilin 羊毛硫抗生素、Bsu6633I 限制性内切酶
基因组	种属约 4.2 Mb、GC 约 43.5%

一、菌株基本特性与来源

Q1.1：ATCC 6633 是什么菌？

革兰阳性芽孢杆菌，直杆状或短链排列，周身鞭毛可运动。最显著特征是会形成内生芽孢——耐热、耐干燥、耐辐射，对环境抵抗力远强于一般细菌繁殖体。

Q1.2：为什么资料里名字不一样（subtilis / spizizenii / 斯氏芽孢杆菌）？

分类学更新所致。

旧分类：枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis
新分类：ATCC 官方归为 B. subtilis subsp. spizizenii，部分文献按新分类直接称 Bacillus spizizenii（斯氏芽孢杆菌）

是同一株菌，不是两个物种——这是客户最常困惑的问题。

Q1.3：来源和历史？

保藏号 NRS 231（美国农业部北方地区研究实验室 NRRL 编号），由 N. R. Smith 保藏。它是 20 世纪中期起用于抗生素效价测定（微生物检定法）的经典标准株，长期被 USP、EP、《中国药典》收录为质控菌。

Q1.4：安全吗？需要什么生物安全防护？

BSL-1 风险等级，非致病性，FDA/EMA 列入 GRAS（Generally Recognized As Safe，公认安全）
日常操作按普通微生物实验要求即可（实验服、手套）
但芽孢可长期存活于环境：操作后所有器具需 121 °C 高压灭菌 15–20 min，避免芽孢污染实验室
不产生临床相关的毒素或致敏物质，但仍仅限科研、质检、教学用途

Q1.5：和金黄色葡萄球菌什么关系？

没有关系。6633 是杆菌 + 芽孢（BSL-1）；金葡是球菌、无芽孢（BSL-2）。若客户说"金葡 6633"，请先确认他们真正要的是哪个用途：

金葡用途 → 推荐 ATCC 6538 / CMCC(B) 26003
抗生素效价/杀孢子/枯草质控 → 推荐 ATCC 6633 / CMCC(B) 63501

二、培养条件与培养基选择

Q2.1：用什么培养基？

用途	推荐培养基
日常培养	TSA / TSB、营养琼脂 / 肉汤、BHI
药敏试验	Mueller-Hinton（MH）琼脂/肉汤
观察芽孢	含 Mn²⁺ 的培养基、Schaeffer's 产孢培养基
API 生化鉴定	API 50 CHB 专用培养基

注意：药敏试验务必用 MH 培养基，使用其他培养基结果不可比。

Q2.2：温度多少？——最常见误区

30 °C 是最适温度，不要默认按 37 °C 操作。

37 °C 虽能生长，但生理状态与芽孢形成效率不同，会偏离标准方法的预期
药典微生物检验通常在 30–35 °C 执行，以引用标准的要求为准

Q2.3：培养多久？

营养琼脂/TSA：24–48 h 长出典型菌落
观察芽孢形成：需延长培养（48–72 h）并做芽孢染色（孔雀绿 / 石炭酸复红法）

Q2.4：需氧还是厌氧？

需氧为主，兼性厌氧；常规培养无须特殊气体。

Q2.5：菌悬液 / 芽孢悬液怎么制备？

繁殖体悬液（用于常规药敏/效价测定）：

挑取新鲜单菌落于 TSB，30 °C 培养 18–24 h
离心收集菌体，生理盐水洗涤
调节浊度至 McFarland 0.5 ≈ 1–2×10⁸ CFU/mL
按各标准要求稀释使用

芽孢悬液（用于杀孢子挑战）：

用产孢培养基诱导芽孢形成（72 h 以上）
80 °C 水浴 10–15 min 热处理，杀死繁殖体
离心洗涤得到纯芽孢悬液
平板计数标定浓度（CFU/mL）
芽孢悬液可稳定存放数年

Q2.6：为什么"培养基不长菌"？

按顺序排查：

温度是否设为 30 °C（不是 37 °C）
培养时间是否充足（24–48 h）
冻干粉是否在效期内、是否曾受热
培养基批号是否做过促生长验证（这正是 6633 的典型用途之一）

三、抗生素效价测定与质控用途

Q3.1：6633 的核心用途是什么？

抗生素效价测定（微生物检定法）——用琼脂扩散法 / 管碟法 / 浊度法的抑菌圈评价抗生素效价。是《中国药典》通则 1201、USP 〈81〉 Antibiotics—Microbial Assay 的标准试验菌。

典型适用抗生素（以现行药典附录为准）：

氨基糖苷类：新霉素、卡那霉素、庆大霉素、链霉素、阿米卡星等
多肽类：多黏菌素 B、杆菌肽等
大环内酯类、四环素类的部分品种

Q3.2：能用于临床药敏试验（AST）的质控吗？

不能混用。

用途	推荐菌株
纸片扩散法（K-B）药敏质控	ATCC 25923（金葡）/ ATCC 25922（大肠）
肉汤稀释法 MIC 药敏质控	ATCC 29213（金葡）/ ATCC 27853（铜绿）
抗生素效价测定	ATCC 6633（枯草）
消毒剂/防腐剂效果评价	ATCC 6538（金葡）/ ATCC 8739（大肠）

客户做 AST 质控，请推荐 25923 / 29213，别推荐 6633。

Q3.3：药典哪些章节用到 6633？

USP〈61〉Microbiological Examination of Nonsterile Products: Microbial Enumeration Tests
USP〈62〉Microbiological Examination of Nonsterile Products: Tests for Specified Microorganisms
USP〈81〉Antibiotics—Microbial Assay
中国药典通则 1201 抗生素微生物检定法
中国药典通则 1105/1106/1107 微生物限度检查（培养基适用性、方法适用性）
欧洲药典（EP） 2.7.2 Microbiological Assay of Antibiotics

Q3.4：能用于灭菌/消毒验证吗？

可以——其芽孢用于杀孢子试验和灭菌工艺挑战。

但要按标准选株，别让客户买错：

灭菌工艺	经典生物指示剂
环氧乙烷（EtO）灭菌	ATCC 9372（Bacillus atrophaeus，枯草黑色变种）
干热灭菌	ATCC 9372
湿热（高压蒸汽）灭菌	Geobacillus stearothermophilus（如 ATCC 7953）
杀孢子剂挑战试验	ATCC 6633 也常被使用

如果客户是做 EtO/干热 BI，请推荐 9372；如果客户是做消毒剂杀孢子挑战或抗生素效价，6633 才对。

Q3.5：还有哪些质控用途？

API 鉴定系统（API 50 CHB）验证参考株
抑菌活性试验指示菌（评价天然提取物、合成抗菌化合物）
培养基促生长验证（培养基适用性检查）
环境监测阳性对照
食品/药品微生物检验阳性对照（中国药典"五菌"之一）
能力验证（PT）/ 实验室间比对标准菌

Q3.6：芽孢特性为什么对检测很重要？

芽孢对消毒剂/灭菌工艺抵抗力最强，是评价"杀灭 vs 抑制"的分水岭——也是 6633 被选作挑战菌的原因之一。如果客户用繁殖体做杀孢子试验，得出的结论会偏乐观。

Q3.7：接种浓度一般多少？

按标准执行：

抗生素效价测定（管碟法/浊度法）：工作菌液按药典附录规定稀释
抑菌效力检查：约 10⁵–10⁶ CFU/mL（g）
消毒剂悬液定量试验：菌悬液 10⁷–10⁸ CFU/mL

接种量直接决定结果判定，务必照标准操作。

四、保藏与复苏方法

Q4.1：冻干粉怎么保存？

ATCC 官方：2–8 °C 避光保存，效期内使用
开封后立即复苏、不要留存
切勿反复冻融

Q4.2：怎么复苏？

在生物安全柜内开启冻干管
加入 0.5–1 mL TSB 或营养肉汤回溶（30 秒左右充分混匀）
取 1–2 环划线 TSA 平板，其余接入 5 mL TSB
30 °C（不是 37 °C）需氧培养 24–48 h
复苏第一代记为 P0

Q4.3：好保藏吗？

比绝大多数菌容易得多——芽孢特性使其耐干燥、耐热：

冻干品：长期（多年）
斜面 / 平板：短期（数周）
沙土管：长期
甘油管（15–20% 甘油，−80 °C）：长期（推荐）

Q4.4：能传几代？

药典要求：自冻干原管起不超过 5 代（P0–P5），并做好传代台账（日期 / 操作人 / 批号）。这是 GMP / CNAS 审计最常见的不符合项之一。

Q4.5：复苏不长怎么办？

按顺序排查：

温度是否 30 °C（不是 37 °C）
培养时间是否延长到 48 h
冻干管是否在效期内、是否曾受热
培养基批号是否验证过
必要时换 BHI 再次回溶
仍失败可联系供应商凭批号申请补发

Q4.6：为什么要特别避免"芽孢满天飞"？

芽孢耐干燥，一旦污染器具/洁净区极难清除——这是实验室里"枯草污染"最常见的来源。建议：

转种后所有器具及时高压灭活
不用的平板先灭活再丢弃
操作区域定期消毒（可用次氯酸钠或 75% 乙醇）

Q4.7：可以工作菌种冷藏（4 °C）传代吗？

可以，但每月应重新从工作菌种库引种，避免传代过多导致表型漂移。

五、遗传背景与鉴定方法

Q5.1：基因组有什么特征？

种属水平基因组约 4.2 Mb、GC 约 43.5%。6633 株特有：

subtilin 羊毛硫抗生素基因簇（spaS / spaB / spaC / spaD / spaE 等）
Bsu6633I 限制性内切酶基因（重组 DNA 与基因分型常用）

Q5.2：怎么鉴定确认身份？

按层级递进：

层级	方法	结果预期
形态	革兰染色 + 芽孢染色	G⁺ 杆菌 + 中央 / 近端芽孢
生化	触酶⁺、VP⁺、氧化酶⁻、运动性⁺	典型枯草谱
仪器	API 50 CHB / VITEK 2 / MALDI-TOF MS	B. subtilis 群
分子	16S rRNA、gyrB / rpoB 测序、WGS	与参考株一致

Q5.3：和 ATCC 9372（枯草黑色变种）怎么区分？

维度	ATCC 6633	ATCC 9372
学名	Bacillus spizizenii	Bacillus atrophaeus
菌落颜色	浅黄褐色	深棕至黑色（黑色素）
核心用途	抗生素效价测定 / 杀孢子挑战	EtO / 干热灭菌 BI
蛋白胨水生长	典型浑浊	可生长但颜色更深

两者都是产芽孢杆菌，但标准用途不同，采购前先确认客户引用的标准编号。

Q5.4：和 ATCC 6051、ATCC 11778 等其他枯草株怎么区分？

编号	别名 / 用途
ATCC 6633	抗生素效价测定、杀孢子挑战、药典微生物检验
ATCC 6051	一般模式株（B. subtilis type strain）
ATCC 11778	工业酶生产、蛋白酶研究
ATCC 23857	蛋白酶高产株

客户引用具体标准时，严格按标准编号推荐，不要"枯草就买 6633"。

Q5.5：基因分型（MLST / 16S）能区分吗？

16S rRNA 测序在枯草群内分辨率有限，建议用 gyrA / gyrB / rpoB 等看家基因
全基因组测序（WGS）能精确区分到株水平

六、采购与合规补充

Q6.1：随货有什么文件？

COA（分析证书）：含批号、鉴定信息、纯度、活菌数
正规渠道可提供 ATCC 原始来源证明
部分供应商可附 MSDS、安全数据表

Q6.2：运输条件？

冻干粉：常温运输即可（芽孢耐性佳，不需要冷链），但避免暴晒高温
甘油菌 / 定量菌悬液：需冷链运输（干冰或冰袋）

Q6.3：能用于临床吗？

不能。虽为 GRAS 非致病菌，仍仅限科研、质检、教学用途，不用于临床诊断与治疗。

Q6.4：能用于食品 / 益生菌产品吗？

作为检验用菌株（食品微生物检验阳性对照）：可以
作为益生菌原料：需另走注册审评，ATCC 6633 不是益生菌生产菌株，不要混淆

Q6.5：效期与补发？

效期以 COA 为准（通常 2–5 年）
确认供应商售后政策（复苏失败是否可补发）
建议每批留 COA 复印件作为客户档案

Q6.6：中国客户用什么株？

涉及中国药典检验，推荐 CMCC(B) 63501（与 6633 同源，可互换使用）。如客户坚持要 ATCC 原号，6633 也可直接使用。

? 客服/技术沟通要点

给一线客服的 3 条黄金法则：

开口先纠正物种：6633 是枯草芽孢杆菌不是金葡。如果客户说要金葡 6633，立即澄清。
培养温度用 30 °C，别按 37 °C 惯性操作——这是 6638 → 6633 最容易踩的坑。
灭菌/消毒验证类需求先确认客户用的是 6633 还是 9372，避免推荐错株（EtO / 干热 BI 应是 9372）。

给技术支持的常见判断树：

客户咨询 → 问用途
├─ 抗生素效价测定 → 6633 ✅
├─ 杀孢子挑战 → 6633 ✅（如果是 EtO/干热 BI → 9372）
├─ 培养基适用性检查 → 6633 ✅
├─ 药敏试验质控 → 25923 / 29213 ❌（不是 6633）
├─ 消毒剂效果评价 → 6538 / 8739 ❌（不是 6633）
└─ 金葡相关 → 6538 / 26003 ❌（不是 6633）

? 相关菌株速查表（防混淆）

ATCC 编号	物种	BSL	核心用途
6633	B. spizizenii（枯草）	1	抗生素效价测定、杀孢子挑战、药典检验
6538	S. aureus（金葡）	2	消毒剂/防腐剂效果评价、药典微生物检验
6538P	S. aureus（金葡衍生株）	2	抗菌塑料（ISO 22196 / JIS Z 2801）指定株
25923	S. aureus	2	纸片扩散法（K-B）药敏质控
29213	S. aureus	2	肉汤稀释法 MIC 药敏质控
8739	E. coli（大肠）	1	消毒剂效果评价（革兰阴性代表）
9027	P. aeruginosa（铜绿）	2	消毒剂效果评价（革兰阴性代表）
10231	C. albicans（白念）	2	消毒剂效果评价（真菌代表）
9372	B. atrophaeus（枯草黑色变种）	1	环氧乙烷 / 干热灭菌 BI
CMCC(B) 63501	B. spizizenii	1	中国药典对应株，与 6633 互换
CMCC(B) 26003	S. aureus	2	中国药典对应株，与 6538 互换