纸片扩散法(K-B 法)是目前药敏试验用得最多的方法之一,而它的质量全靠质控株盯梢。金黄色葡萄球菌 ATCC 25923 是 CLSI M100 指定的葡萄球菌属纸片法质控株。这篇把 25923 在 K-B 法里的具体用法、操作参数和常见坑讲清楚。
一、25923 在 K-B 法里的角色
K-B 法的结果(抑菌圈直径)受纸片效价、培养基、菌液浓度、接种方式、培养条件等多因素影响。25923 作为敏感型质控株(不产 β-内酰胺酶),它的抑菌圈直径必须落在 CLSI M100 公布的质控范围内——偏大提示培养基或纸片有问题,偏小提示菌液浓度或培养有问题。任何偏离,当天该批次的临床药敏结果都不可信。
二、操作参数(依据 CLSI M02 与 M100)
| 步骤 |
参数 |
| 菌悬液浓度 |
调至 0.5 麦氏浊度(约 1.5×10⁸ CFU/mL) |
| 接种时限 |
调菌后 15 分钟内完成涂布 |
| 培养基 |
MHA(Mueller-Hinton 琼脂),厚度 4 mm,pH 7.2~7.4 |
| 纸片贴放 |
接种后 15 分钟内贴完,纸片间距 ≥24 mm |
| 培养条件 |
35°C±2°C,16~18 小时 |
| 判读 |
量抑菌圈直径(mm),与 M100 质控范围比对 |
常用质控药物:氨苄西林、头孢氨苄、头孢噻吩、头孢西丁、庆大霉素、卡那霉素、红霉素、四环素、氯霉素、新生霉素等。每种纸片在 M100 中都有 25923 的质控范围。
三、25923 的其他质控用途
- CAMP 试验阳性对照:单核细胞增生李斯特菌 CAMP 试验中,25923 与金黄色葡萄球菌 ATCC 13813 等配合,验证溶血增强现象是否正常。
- Mueller-Hinton 琼脂验收:新批次 MHA 启用前,用 25923 跑标准菌株的质控范围验证。
- 革兰氏染色阳性对照、凝固酶试验阳性对照。
- 商业系统验证:Abbott、Autobac 等药敏系统的质控标准菌株。
四、质控频次与失控处理
- 常规:每周至少一次;新批次培养基/纸片启用时必做。
- 失控排查顺序:①培养基(pH、厚度、批号)→ ②纸片(效价、存放)→ ③菌液浓度(比浊仪校准)→ ④操作(接种时限、培养条件)。
- 记录:质控结果、菌株批号(COA)、代次、传代日期齐全,CMA/CNAS 评审必查。
五、常见误区
- 拿 25923 做稀释法(MIC)质控:稀释法用 29213,25923 没有稀释法质控范围。
- 菌液浓度凭感觉:0.5 麦氏必须校准,浓度高了抑菌圈偏小,低了偏大。
- 培养超时:超过 18 小时再读,抑菌圈会偏大,判读失效。
- 传代失控:25923 建议琼脂到琼脂传代,肉汤传代会影响 MIC 稳定性。
参考资料
- CLSI M100《Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing》;CLSI M02(纸片扩散法)
- ATCC 官网:Staphylococcus aureus 25923 产品页
- 国家/地方耐药监测技术规范中医用质控菌株的要求
试验参数来自公开权威标准文本,执行时以最新有效版本原文为准。