药敏质控不能只盯着肠杆菌科。铜绿假单胞菌 ATCC 27853 是非发酵菌的代表质控株,管着碳青霉烯类、氨基糖苷类、喹诺酮类等一大批药物的质控范围。这篇把 27853 在非发酵菌药敏质控里的用法讲清楚。
一、为什么非发酵菌要单列质控株
铜绿假单胞菌是院内感染最常见的非发酵菌之一,天然耐药谱广,对很多药物不敏感。它的药敏判读与肠杆菌科不同(如固有耐药、MIC 范围跨度大),需要一支表型稳定的代表株来验证试验系统。ATCC 27853 就是 CLSI 指定的这个角色——非发酵菌药敏质控的"金标准"株。
二、纸片法与稀释法用法(依据 CLSI M02/M07 与 M100)
| 项目 |
纸片法 |
稀释法(MIC) |
| 菌悬液 |
0.5 麦氏(约 1.5×10⁸ CFU/mL) |
0.5 麦氏稀释,最终约 5×10⁵ CFU/mL |
| 培养基 |
MHA |
CAMHB |
| 培养 |
35°C±2°C,16~18 小时 |
35°C±2°C,16~20 小时 |
| 判读 |
抑菌圈直径 vs M100 范围 |
MIC 值 vs M100 范围 |
常用质控药物:哌拉西林/他唑巴坦、头孢他啶、头孢吡肟、亚胺培南、美罗培南、庆大霉素、阿米卡星、环丙沙星、左氧氟沙星、多黏菌素等。每种药物在 M100 中都有 27853 的质控范围。
特别注意:27853 突变快,需要重复某药测试时不能传代复测,必须新开管从原始菌种重做。
三、其他质控用途
- Mueller-Hinton 琼脂验收:新批次 MHA 启用时用 27853 验证;
- 水质/废水检测:Quanti-Cult 形式定量 QC(单次接种 <50 CFU 模拟水样),用于水/废水质量控制;
- 食品检测:部分食品微生物检验方法的质控;
- 商业系统验证:VITEK、MicroScan、Sensititre 等自动化系统质控。
四、失控排查顺序
- 接种浓度:0.5 麦氏校准、稀释准确度(非发酵菌 MIC 对浓度敏感);
- 培养基:CAMHB 阳离子浓度、MHA 厚度与 pH;
- 药粉:配制与存储(碳青霉烯类尤其不稳定);
- 菌株:确认是 27853、代次 ≤5 代、未用传代复测;
- 培养条件:温度、时间。
五、常见误区
- 用传代培养物复测:27853 突变快,复测必须新开管;
- 拿 27853 做消毒检测:消毒/抗菌材料检测的铜绿假单胞菌通常用 9027(详见对比文章);
- 忽视 BSL-2:条件致病菌,操作按 BSL-2 执行。
参考资料
- CLSI M100《Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing》;CLSI M02(纸片法)、M07(稀释法)
- ATCC 官网:Pseudomonas aeruginosa 27853 / 27853-MINI-PACK / CRM-27853 产品页
- CLSI M2-A9、M7-A8;ISO 20776-1
- Thermo WaterBugs 27853 产品资料(水质质控应用)
试验参数来自公开权威标准文本,执行时以最新有效版本原文为准。