稀释法(MIC)药敏质控和纸片法是两套体系,质控菌株也各用各的:金黄色葡萄球菌的 MIC 质控认准 ATCC 29213。这篇把 29213 在肉汤稀释法/琼脂稀释法里的用法、参数和注意事项讲清楚。
一、29213 在 MIC 质控里的角色
MIC 法测的是抗菌药物抑制细菌生长的最低浓度(μg/mL),结果受接种浓度、培养基阳离子浓度、培养时间影响很大。29213 作为产 β-内酰胺酶的金葡质控株,承担两类任务:
- 验证稀释法整套系统(CAMHB 质量、接种浓度、药粉配制、培养条件)是否在控;
- 监控 β-内酰胺类药物及含酶抑制剂复合制剂在 MIC 体系里的表现——产酶株对这类药物更敏感,抑制剂失效会直接反映在 MIC 上。
二、肉汤稀释法操作参数(依据 CLSI M07 与 M100)
| 项目 |
要求 |
| 培养基 |
CAMHB(阳离子调节 MH 肉汤) |
| 最终接种浓度 |
约 5×10⁵ CFU/mL(0.5 麦氏菌液 1:100 稀释后加入等体积药液) |
| 培养条件 |
35°C±2°C,需氧,16~20 小时 |
| 判读 |
MIC 值(μg/mL),与 M100 规定的 29213 质控范围比对 |
| 质控频次 |
每周至少一次;新批次培养基/药粉启用时必做 |
三、琼脂稀释法要点
- 培养基:MHA(含 2 倍浓度抗菌药物梯度);
- 接种:多点接种器接种约 10⁴ CFU/点;
- 培养:35°C±2°C,16~20 小时;
- 判读:完全抑制生长的最低药物浓度即为 MIC,与 M100 范围比对。
四、失控排查顺序
- 接种浓度:0.5 麦氏是否校准,稀释步骤是否准确——MIC 质控失控最常见的原因就在这;
- 培养基:CAMHB 的 Ca²⁺/Mg²⁺ 浓度、pH、批次;
- 药粉:配制浓度、存储(β-内酰胺类不稳定,现配现用或按规程保存);
- 菌株:确认用的是 29213 而非 25923,确认代次 ≤5 代;
- 培养条件:温度、时间是否偏离。
五、常见误区
- 用 25923 做 MIC 质控:25923 没有稀释法质控范围,结果无判据;
- 传代失控:肉汤传代会改变 MIC 水平,尽量琼脂传代、及时冻存;
- 忽略每天质控:自动化药敏系统建议按厂商方案每日质控;
- 29213 当消毒检测株:消毒/抗菌材料检测用的是 6538,别混(详见 6538 对比文章)。
参考资料
- CLSI M100《Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing》;CLSI M07(稀释法)
- ATCC 官网:Staphylococcus aureus 29213 产品页
- ISO 20776-1(体外药敏试验方法学要求)
- 国家/地方耐药监测技术规范中医用质控菌株的要求
试验参数来自公开权威标准文本,执行时以最新有效版本原文为准。