菌株来源与保藏信息
阪崎肠杆菌 ATCC 29544(Cronobacter sakazakii (Farmer et al.) Iversen et al.)菌株代号 CDC 4562-70(Ct2(MR-),CDC 78-067947),由 JJ Farmer 于 1970 年代分离自一名儿童的咽喉。该株为 阪崎肠杆菌模式株(Type strain),已完成全基因组测序,是 DNA 杂交试验的参考菌株。分类学上曾命名为 Enterobacter sakazakii,2008 年归入新属 Cronobacter。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代形式提供本菌株,附 ATCC 官方证书(COA)。婴幼儿配方食品检验(GB 4789.40)的阳性对照首选此株。
生物学特性
阪崎肠杆菌为革兰阴性直杆菌,属肠杆菌科克罗诺杆菌属,兼性厌氧,具周生鞭毛,有动力。菌落圆形、边缘整齐、不透明、表面湿润,在 TSA 上呈黄褐色菌落(产生黄色素),典型菌落直径 1–2 mm。
| 特征 | ATCC 29544 表现 |
| 革兰染色 | 阴性 |
| 动力 | 阳性(周生鞭毛) |
| 黄色素 | TSA 上黄褐色菌落 |
| 触酶 | 阳性 |
| α-葡萄糖苷酶 | 阳性(DFI/阪崎肠杆菌显色培养基筛选依据) |
| 生长温度 | 6–45°C(最适 30–37°C) |
| 耐渗透压 | 可耐高渗环境,奶粉基质中存活能力强 |
在阪崎肠杆菌显色培养基(如 DFI)上呈蓝绿色菌落,在 VRBGA 上呈紫红色菌落。该菌耐干燥、耐热(70°C 以上可灭活),能在低水分食品中长期存活。
培养条件与保藏方法
复苏步骤
- 冻干粉室温平衡 10–15 分钟。
- 生物安全柜内用 0.5–1.0 mL 无菌营养肉汤(ATCC Medium 3)重悬冻干粉。
- 悬液转接至 5–6 mL 营养肉汤管,混匀后取数滴划线接种营养琼脂平板。
- 30°C 需氧培养 24 h。初次复苏可延长至 48 h。
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | 营养琼脂(NA)、TSA、阪崎肠杆菌显色培养基(DFI/CSID) |
| 液体培养基 | 营养肉汤、TSB |
| 温度 | 30°C(GB 4789.40 指定) |
| 培养时间 | 18–24 h |
| 气体环境 | 需氧 |
保藏建议
| 保藏方式 | 条件 | 有效期 |
| 短期工作菌种 | 营养琼脂斜面 2–8°C,每月传代 | 1 个月 |
| 中长期冻存 | 15–20% 甘油肉汤,-70°C | ≥ 2 年 |
| 长期保藏 | 冷冻干燥法 | ≥ 10 年 |
⚠ 注意:本菌株为 BSL-1,但属食源性病原(可致新生儿脑膜炎/败血症),操作仍建议在生物安全柜内进行。模式株表型稳定,仍按 ≤5 代原则管理工作菌种。
质控与标准化应用
婴幼儿配方食品检验
ATCC 29544 是 GB 4789.40(克罗诺杆菌属检验)指定的阳性对照菌株,用于选择性增菌培养基(mLST 加万古霉素)、显色培养基及鉴定体系的性能验证。婴幼儿配方食品中克罗诺杆菌属为不得检出的控制项目,质控要求严格。
分子检测与鉴定参考
作为模式株,29544 的全基因组数据(GenBank AX109554 等)用于 PCR、测序及 MALDI-TOF 鉴定方法的建立与验证,是克罗诺杆菌属分类学研究的基准株。
环境与工艺监控
奶粉生产线的环境监控(人员、设备表面)常以 29544 作为挑战菌验证清洁消毒效果及环境监测方法的回收率。
常见问题与注意事项
Q: 阪崎肠杆菌和克罗诺杆菌是什么关系?
克罗诺杆菌(Cronobacter)是 2008 年从肠杆菌属(Enterobacter)独立出的新属,原"阪崎肠杆菌"更名为"阪崎克罗诺杆菌"(C. sakazakii)。ATCC 29544 是 C. sakazakii 的模式株,两个名称在文献中均常见。
Q: 为什么培养温度是 30°C 而不是 37°C?
GB 4789.40 及 ISO 22964 指定 30°C 培养,与克罗诺杆菌属的最适生长温度一致,且有助于避免杂菌干扰。日常传代维持也建议 30°C。
Q: 29544 与 200957 如何选用?
29544 为模式株,常用于方法验证、鉴定体系确认与阳性对照;200957(另一株 C. sakazakii)可作为平行参考株。常规食品检验质控选 29544 即可。
Q: 29544的低温生长能力对奶粉安全意味着什么?
阪崎肠杆菌在10-15°C仍可缓慢增殖——室温放置>2h的冲调后奶粉是阪崎肠杆菌感染的高风险场景。WHO建议冲调后奶粉应在2h内饮用完毕或立即冷藏——以29544验证的冷藏条件下阪崎肠杆菌的存活曲线表明:4°C冷藏可抑制生长但不杀灭——24h冷藏后菌量不变——复温后恢复增殖。
订购信息
| 产品名称 | 阪崎肠杆菌标准菌株 ATCC 29544 |
| 拉丁名 | Cronobacter sakazakii (Farmer et al.) Iversen et al. |
| 保藏中心编号 | ATCC 29544 |
| 菌株代号 | CDC 4562-70(模式株) |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 官方证书 |
| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
| 生物安全等级 | BSL-1 |
| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息及相关标准文件,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Cronobacter sakazakii (Farmer et al.) Iversen et al. 29544 — 产品页与 COA
- GB 4789.40—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 克罗诺杆菌属(阪崎肠杆菌)检验
- ISO 22964:2017 Microbiology of the food chain — Horizontal method for the detection of Cronobacter spp.
- WHO/FAO (2008): Enterobacter sakazakii in powdered follow-up formulae — MRA Series 15
- Iversen C et al. (2008): Taxonomy of Cronobacter — BMC Evolutionary Biology