菌株来源与保藏信息
口腔支原体 ATCC 23714(Mycoplasma orale)菌株代号 CH 19299(NCTC 10112),分离自人口咽部,为模式株(Type strain)。口腔支原体是人口腔与呼吸道常见的共生支原体,也是细胞培养支原体污染的主要来源之一,因此被列为药典支原体检查(USP <63>、EP 2.6.7、中国药典 3301)及细胞培养质检的标准参考株。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代形式提供本菌株,附 ATCC 官方证书(COA)。定量基因组 DNA 版本(23714-TTR/qCRM)可用于 qPCR 标准曲线建立。
生物学特性
口腔支原体为支原体属成员,无细胞壁,是已知可自行繁殖的最小原核生物之一。菌体多形(球形、丝状),革兰染色不易着色(常以姬姆萨染色观察)。在支原体固体培养基上 37°C 培养 4–7 天形成典型的"煎蛋样"(fried-egg)菌落,中心致密、周边薄透。
| 特征 | ATCC 23714 表现 |
| 细胞壁 | 无(对 β-内酰胺类天然耐药) |
| 菌落形态 | "煎蛋样"典型菌落 |
| 精氨酸水解 | 阳性(精氨酸支原体群特征) |
| 葡萄糖发酵 | 阴性 |
| 生长温度 | 35–37°C(微需氧/厌氧有利于固体培养) |
| 培养时间 | 液体 1–4 天变色;固体 4–7 天 |
口腔支原体生长需要甾醇(通常由 10–20% 马血清提供)。液体培养基中生长表现为酚红指示剂变色(精氨酸水解产碱),通常无可见浑浊。
培养条件与保藏方法
复苏步骤
- 冻干粉室温平衡 10–15 分钟。
- 生物安全柜内,用 0.5–1.0 mL 支原体肉汤(含 10–20% 马血清与青霉素)重悬冻干粉。
- 采用连续稀释法:悬液转接至 4.5 mL 肉汤管,再逐管稀释(0.5 mL → 4.5 mL),保留空白对照管。
- 37°C 培养,观察肉汤变色(黄色→红色)即示生长;固体平板需 4–7 天低氧/厌氧培养。
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
| 液体培养基 | 精氨酸支原体肉汤(含血清+青霉素,如 ATCC Medium 243) |
| 固体培养基 | 支原体琼脂(如 ATCC Medium 243 加琼脂) |
| 温度 | 37°C |
| 培养时间 | 液体 1–4 天;固体 4–7 天 |
| 气体环境 | 液体需氧;固体需 5–10% CO₂ 或厌氧袋 |
保藏建议
| 保藏方式 | 条件 | 有效期 |
| 短期 | 肉汤培养物 2–8°C(变色后尽快转接) | 数天 |
| 中长期冻存 | 冻存管(含血清/甘油),-70°C 或液氮 | ≥ 2 年 |
| 长期保藏 | 冷冻干燥法 | ≥ 10 年 |
⚠ 注意:支原体生长极慢且易在碱性条件下迅速死亡——变色后应立即转接或冻存,不可等待过久。固体培养必须保持湿度,防止培养基干裂。本菌株 BSL-2,需在生物安全柜中操作。
质控与标准化应用
药典支原体检查
ATCC 23714 是 USP <63>、EP 2.6.7 及中国药典 3301 支原体检查法的标准参考株之一,用于生物制品(疫苗、细胞治疗产品)支原体污染检测的阳性对照与培养基促生长能力验证。
细胞培养污染监测
口腔支原体是细胞培养最常污染的环境支原体之一(约占污染 10–20%),23714 作为阳性对照用于细胞培养上清液的培养法、荧光染色法及 PCR 法支原体检测。
qPCR 定量参考
定量基因组 DNA(qCRM-23714D)用于实时荧光 PCR 的绝对定量标准曲线建立,覆盖药典"核酸扩增技术(NAT)"支原体检查法。
常见问题与注意事项
Q: 支原体为什么难培养?
支原体无细胞壁、基因组小(约 0.6–1.4 Mb)、生长慢(倍增 1–6 h),需甾醇与复杂营养,且易受培养基成分(如青霉素选择性、血清质量)影响。固体培养需 4–7 天并保持湿度。
Q: 23714 与肺炎支原体 15531 如何区分?
23714(口腔支原体)精氨酸水解阳性、葡萄糖发酵阴性,分离自口腔;15531(肺炎支原体,现 Mycoplasmoides pneumoniae)葡萄糖发酵阳性、精氨酸阴性,为呼吸道病原。两者均为药典支原体检查参考株,用途互补。
Q: 细胞培养污染了口腔支原体怎么处理?
支原体对多种抗生素耐药(无细胞壁),污染细胞通常建议废弃;重要细胞系可尝试支原体清除试剂(如 BM-Cyclin、Mynox)处理,处理后必须复检确认清除。
Q: 23714支原体污染如何清除?
支原体无细胞壁——β-内酰胺类和糖肽类抗生素完全无效。清除方案:Plasmocin(含泰妙菌素+环丙沙星组合——商品化支原体清除试剂)处理细胞培养物14天——同时以23714做阳性对照验证清除效果。撤药后至少传代3次再检测——确认无支原体复苏。
订购信息
| 产品名称 | 口腔支原体标准菌株 ATCC 23714 |
| 拉丁名 | Mycoplasma orale |
| 保藏中心编号 | ATCC 23714(CH 19299 / NCTC 10112) |
| 模式株 | 是(Type strain) |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 官方证书 |
| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
| 生物安全等级 | BSL-2 |
| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息及相关标准文件,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Mycoplasma orale 23714 — 产品页与 COA
- USP <63> Mycoplasma Tests;EP 2.6.7 Mycoplasmas
- 中国药典 2020 年版 通则 3301 支原体检查法
- NCTC 10112 菌种库记录(UKNCC)
- ChP通则3301《支原体检查法》
- Rottem S (2003): Interaction of mycoplasmas with host cells — Physiological Reviews