菌株来源与保藏信息
铜绿假单胞菌 ATCC 9027（Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula）是 American Type Culture Collection 保藏的一株经典非发酵革兰阴性标准菌株。该菌株最早分离自外耳道感染临床样本，经 ATCC 多代鉴定和纯化后，被收录为微生物质控参考菌株，在全球制药、化妆品、消毒剂行业的抑菌效力评价中具有核心地位。
ATCC 产品形式包括 9027（冻干粉）和 9027-PK（加标片），另衍生定量菌株 CRM-9027 满足定量接种需求。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代形式提供本菌株，每批次附带 ATCC 检测报告（Certificate of Analysis），含 ATCC 批号信息。
生物学特性
铜绿假单胞菌 ATCC 9027 为革兰阴性杆菌，菌体直或微弯，单端单鞭毛运动。最显著特征是产生两种水溶性色素：绿脓素（pyocyanin，蓝绿色）和荧光素（pyoverdine，黄绿色荧光），在特定培养基（Pseudomonas Agar P / King's A）上表现典型。
| 特征 | ATCC 9027 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阴性杆菌 |
| 氧化酶 | 阳性 |
| 触酶 | 阳性 |
| 色素 | 绿脓素 + 荧光素（Pseudomonas Agar P 上最佳） |
| 42°C 生长 | 阳性（区别于其他假单胞菌的关键特征） |
| 硝酸盐还原 | 产氮气 |
| 明胶液化 | 阳性（快速） |
| 生长温度 | 20–42°C（最适 35±2°C） |
| 气味 | 特征性葡萄样甜味（2-氨基苯乙酮） |
在 TSA 平板上 35°C 培养 18–24h 形成直径 2–4 mm 的扁平、不规则边缘、金属光泽菌落，表面常呈磨砂玻璃样。在紫外灯（365nm）下可见荧光。
培养条件与保藏方法
复苏步骤
- 取出 ATCC 9027 冻干粉，室温平衡 10–15 分钟。
- 在生物安全柜中，用无菌吸管加入 0.3–0.5 mL 无菌 TSB 或生理盐水，轻轻吹打重悬。
- 取悬液接种至 TSA 平板或 Pseudomonas Agar P 平板（用于色素验证），同时接种 TSB 肉汤管。
- 35±2°C 需氧培养 18–24 小时。初次复苏生长速度正常，18h 即可见典型菌落。
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA、Pseudomonas Agar P、BHI 琼脂 |
| 液体培养基 | TSB、BHI 肉汤 |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 18–24 h（平板）；14–18 h（肉汤，OD₆₀₀≈0.8–1.5） |
| 气体环境 | 严格需氧（厌氧条件下不生长或生长极差） |
保藏建议
| 保藏方式 | 条件 | 有效期 |
|---|
| 短期工作菌种 | TSA 斜面 2–8°C，每月传代 | 1 个月 |
| 中长期冻存 | 15–20% 甘油 TSB，-70°C / 液氮 | ≥ 2 年 |
| 长期保藏 | 冷冻干燥法 | ≥ 10 年 |
⚠ 注意：ATCC 9027 在室温下存活能力强，易在实验室环境形成气溶胶污染。每次操作后务必用有效消毒剂（70% 乙醇或季铵盐类）擦拭工作台面。长期存放于 TSA 斜面 4°C 时建议每 2 周传代一次，因为该菌株的蛋白酶和脂肪酶活性可在低温下继续缓慢代谢培养基成分。
质控与标准化应用
防腐功效试验（Challenge Test）
ATCC 9027 是各版药典防腐效力检查中的革兰阴性挑战菌代表。在 ChP 1121、USP <51>、EP 5.1.3 和 ISO 11930（化妆品）中，ATCC 9027 与 ATCC 6538（金黄色葡萄球菌）、ATCC 8739（大肠埃希菌）、ATCC 10231（白色念珠菌）、ATCC 16404（巴西曲霉）共同组成五菌挑战组合。典型接种量 10⁵–10⁶ CFU/mL，在 0h/6h/24h/7d/14d/28d 取样计数。铜绿假单胞菌因对弱酸和某些防腐剂（如苯甲酸钠在低 pH 下）具有较高的固有耐受性，常是防腐体系中最先突破的挑战菌——若 ATCC 9027 的对数降幅不达标，提示配方需强化。
消毒剂效力评价
在 EN 1040、EN 1276 和 EN 13727 等欧洲消毒剂标准中，ATCC 9027 作为代表性革兰阴性菌纳入强制测试菌株组合。铜绿假单胞菌对季铵盐类、醛类、含氯消毒剂通常敏感，但应注意其在生物膜形成后对消毒剂的耐受性可升高 10–1000 倍——悬浮试验通过不代表生物膜试验通过，必要时应补充 EN 13697（无孔表面）或 ASTM E2871（生物膜消毒效力）试验。
化妆品与药品微生物限度检查
在《化妆品安全技术规范》和 ChP 1105/1106 中，铜绿假单胞菌为控制菌检查指定项目之一。ATCC 9027 用作阳性对照验证培养基的促生长能力、样品中抑菌成分的中和效果以及整体方法适用性。在无菌检查方法验证中，ATCC 9027 也常被选作挑战菌代表非发酵革兰阴性杆菌群体。
ATCC 9027 vs ATCC 27853 的分工
同为铜绿假单胞菌，ATCC 9027 与 ATCC 27853 的应用场景不同：9027 主要用于防腐/消毒效力评价（因其菌落形态典型、产色素、生物膜形成能力强），而 27853 主要用于药敏试验质控（CLSI M100 为其指定了 MIC 质控范围）。两者不可混用——选错株可能导致实验结论不被法规认可。
常见问题与注意事项
Q: 传代后色素减弱或不产色素？
ATCC 9027 的色素表达受培养基铁离子浓度影响显著。Pseudomonas Agar P（King's A 配方：蛋白胨 + 甘油 + K₂SO₄ + MgCl₂，低铁）可促进绿脓素产生。普通 TSA 上色素较弱属正常；若 Pseudomonas Agar P 上也无色素，检查传代是否超过 5 代或冻存条件是否退化。
Q: 肉汤培养中出现粘稠拉丝现象？
铜绿假单胞菌分泌藻酸盐胞外多糖，在静置肉汤中可在液气界面形成菌膜（pellicle），摇晃时出现粘稠拉丝。这不是污染——正相反，是 ATCC 9027 的典型特征。若要用于定量接种，需震荡混匀后再取样，或使用含低浓度表面活性剂（0.05% Tween 80）的稀释液。
Q: 为什么防腐挑战中 9027 的 log reduction 总比 6538（金黄色葡萄球菌）低？
这是正常且可预期的。铜绿假单胞菌的外膜（含 LPS）和主动外排泵系统赋予其对多种防腐剂的固有耐受性，远高于无外膜的革兰阳性菌。若 9027 达标而 6538 不达标，反而需要排查实验失误。
Q: 如何快速鉴别 9027 vs 27853？
42°C 生长 + 氧化酶阳性 + Pseudomonas Agar P 上产绿脓素可基本确认为铜绿假单胞菌。要区分 9027 和 27853：42°C 生长与产色素能力均无明显差异，可靠区分需依赖 MALDI-TOF MS 蛋白指纹图谱或全基因组分析（两者在 GenBank 中的基因组序列差异可分辨）。不建议用 API 20NE 分型——两个菌株在生化谱上几乎完全重叠。
订购信息
| 产品名称 | 铜绿假单胞菌标准菌株 ATCC 9027 |
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| 拉丁名 | Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula |
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| 保藏中心编号 | ATCC 9027 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告 |
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| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M100、现行药典及消毒剂测试标准，仅供实验室专业人员参考。实际培养与实验条件应结合具体体系验证。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。
参考资料
- ATCC 官网：Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula 9027 — 产品页与 COA
- 中国药典（ChP）2020 年版：通则 1121、1105、1106
- USP <51> Antimicrobial Effectiveness Testing
- EP 5.1.3 Efficacy of Antimicrobial Preservation
- ISO 11930: Cosmetics — Microbiology
- EN 1040 / EN 1276 / EN 13727 消毒剂定量悬浮试验标准
- CLSI M100 Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing（ATCC 27853 质控范围）
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