菌株来源与保藏信息
金黄色葡萄球菌 ATCC 6538（Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach）是 American Type Culture Collection 保藏的一株经典标准菌株。该菌株最初分离自人类临床样本，经多代纯化后作为质控参考菌株在全球微生物实验室中广泛使用。ATCC 产品编号包括 6538（冻干粉）、6538-PK（加标片）及衍生定量菌株 CRM-6538，满足不同实验形式需求。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代形式提供本菌株，每批次附带 ATCC 检测报告（Certificate of Analysis），含批号信息。常规复苏后工作菌种可连续使用至第 5 代，建议不超过第 5 代以避免关键表型漂移。
生物学特性
金黄色葡萄球菌 ATCC 6538 为革兰阳性球菌，直径约 0.5–1.5 μm，镜下呈葡萄串状或不规则簇状排列。该菌株无芽孢、无鞭毛，部分菌体可表达荚膜多糖。
| 特征 | ATCC 6538 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阳性 |
| 凝固酶 | 阳性（游离 coagulase + 结合 clumping factor） |
| 溶血性 | β 溶血（血琼脂上完全透明溶血环） |
| 触酶 | 阳性（产大量过氧化氢酶） |
| 甘露醇发酵 | 阳性（MSA 上黄色菌落） |
| DNase | 阳性 |
| 生长温度 | 30–37°C（最适 35±2°C）；4°C 可短期存活，不增殖 |
在 TSA 平板上 35°C 培养 18–24h 后形成直径 1–3 mm 的圆形、凸起、光滑、金黄色菌落。菌落色素为非扩散性类胡萝卜素（staphyloxanthin），在营养贫瘠培养基或厌氧条件下色素表达减弱。
培养条件与保藏方法
复苏步骤
- 取出 ATCC 6538 冻干粉，室温平衡 10–15 分钟。
- 在生物安全柜中，用无菌吸管加入 0.3–0.5 mL 无菌 TSB 或生理盐水，轻轻吹打至完全重悬。
- 取全部悬液接种至 TSA 斜面或平板，同时接种 5 mL TSB 肉汤管。
- 35±2°C 需氧培养 18–24 小时。初次复苏可能需延长至 48 小时——若 24h 菌落细小属正常现象，传一代后恢复典型生长。
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA（胰酪胨大豆琼脂）、BHI 琼脂、营养琼脂 |
| 液体培养基 | TSB（胰酪胨大豆肉汤）、BHI 肉汤 |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 18–24 h（平板）；16–20 h（肉汤，OD₆₀₀≈0.5–1.5） |
| 气体环境 | 需氧（兼性厌氧可生长但菌落偏小） |
保藏建议
| 保藏方式 | 条件 | 有效期 |
|---|
| 短期工作菌种 | TSA 斜面 2–8°C，每月传代 | 1 个月 |
| 中长期冻存 | 15–20% 甘油 TSB，-70°C / 液氮 | ≥ 2 年 |
| 长期保藏 | 冷冻干燥法（lyophilization） | ≥ 10 年 |
⚠ 注意：频繁传代可能导致凝固酶表达减弱或 MIC 漂移，建议每 5 代回到冻存管开启新工作批。不推荐反复冻融——每次融化后立即接种，剩余冻存液不再回冻。
质控与标准化应用
防腐功效试验（Challenge Test）
ATCC 6538 是各版药典（ChP 1121、USP <51>、EP 5.1.3）防腐效力检查中指定的革兰阳性挑战菌。典型接种量为 10⁵–10⁶ CFU/mL，在 0h、24h、48h、7d、14d、28d 等时间点取样计数，以对数减少值（log reduction）判定防腐体系是否合格。ATCC 6538 在无防腐基质中的稳定增殖特性使其成为理想阳性对照。
消毒剂效力评价
在 EN 1040（基础悬浮试验）、EN 1276（食品/工业/家用化学消毒剂）、AOAC 等方法中，ATCC 6538 常作为代表性革兰阳性菌被纳入标准菌株组合。金黄色葡萄球菌对季铵盐类和酚类消毒剂中等敏感，对氯己定（CHG）及含碘制剂的敏感性因接触时间而异。
化妆品与药品微生物限度检查
《化妆品安全技术规范》微生物检验方法中，金黄色葡萄球菌为控制菌检查的必检项目。ATCC 6538 作为阳性对照菌用于验证培养基促生长能力、中和效果及方法适用性。在药品非无菌产品微生物限度检查（ChP 1105/1106）中，金黄色葡萄球菌同样列为控制菌指标。
抑菌圈法与 MIC 测定
ATCC 6538 在纸片扩散法（Kirby-Bauer）中对多种抗菌药物呈现标准敏感谱。在非药敏场景（如天然产物抑菌筛选、新材料抗菌测试）中可作为良好的敏感指示菌——其生长快速、菌落形态易辨识、试验重复性好，适合高通量筛选平台。
常见问题与注意事项
Q: 为什么复苏后菌落不是金黄色？
初次从冻干粉复苏时，菌落可能呈灰白色或乳白色——此为正常现象。传代 1–2 次后，在营养充足的 TSA 上延长至 36–48h，金黄色色素（staphyloxanthin）逐渐显现。若长期未见，请检查培养基批次或降低温度至 30°C 延长培养。
Q: 凝固酶结果不确定？
推荐使用兔血浆（EDTA 抗凝）进行试管凝固酶试验。玻片法检测 clumping factor 快捷但偶尔假阴性——若玻片法阴性务必补做试管法，孵育 4h 和 24h 两个时间点判读。
Q: 菌株传代次数上限？
ATCC 6538 规定的工作菌种代次上限为第 5 代（以原装为第 0 代）。实践建议在第 3–4 代时开启新冻存管。传代过多（> 10 代）可能导致生长速率变化、凝固酶减弱或生物膜形成能力变异。
订购信息
| 产品名称 | 金黄色葡萄球菌标准菌株 ATCC 6538 |
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| 拉丁名 | Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach |
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| 保藏中心编号 | ATCC 6538 |
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| GenBank 参考 | CP066244（完整基因组），16S rRNA: L37597 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告 |
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| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M100 文件以及现行药典标准，仅供实验室专业人员参考。实际培养条件应结合具体实验体系和基质进行调整。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。
参考资料
- ATCC 官网：Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach 6538 — 产品页与质控证书（COA）
- CLSI M100 — Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing，现行版本
- 中国药典（ChP）2020 年版：通则 1121、1105、1106
- USP <51> Antimicrobial Effectiveness Testing
- EP 5.1.3 Efficacy of Antimicrobial Preservation
- EN 1040、EN 1276 消毒剂定量悬浮试验标准
- ISO 11930 化妆品微生物防腐保护评价
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