菌株来源与保藏信息
ATCC 25923(Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach)是 CLSI 推荐的纸片扩散法(Kirby-Bauer)药敏试验的标准质控菌株,BSL-2。该菌株为凝固酶阳性、mecA 阴性的甲氧西林敏感型金黄色葡萄球菌(MSSA)——是临床微生物室每日药敏质控的核心菌株之一。与 29213(MIC 法葡萄球菌质控株)不同,25923 专门用于纸片扩散法的质量控制——其抑菌圈直径范围已被 CLSI M100 中数百个实验室的多中心协同研究(M23-A4)严格验证。25923 在美国临床微生物室中的使用频率在所有质控菌株中排名前三。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 25923 表现 |
| 革兰染色 | 阳性球菌,葡萄串状排列 |
| 凝固酶(试管法) | 阳性——4h 内凝固 |
| 触酶 | 阳性 |
| 甘露醇发酵 | 阳性——MSA 上黄色菌落 |
| 溶血 | β 溶血 |
| mecA/PBP2a | 阴性——MSSA |
| 头孢西丁(30μg) | ≥22mm(MSSA 判据) |
| 菌落形态 | TSA 上乳白色、光滑凸起——24h 直径 2-3mm |
| 应用定位 | 纸片扩散法(KB 法)质控——非 MIC 法质控 |
| 与 29213 区别 | 25923=KB 法 QC;29213=MIC 法 QC |
ATCC 25923 和 29213 虽然同为 MSSA——但 CLSI 将两者的 QC 范围分别列入 M100 的不同表格——不可互换使用。25923 的抑菌圈直径 QC 范围是在 5% 羊血或脱纤维马血 MHA 上建立的——若使用制造商不同批次的 MHA,抑菌圈可能偏差 ±2mm——特别是万古霉素(分子量 1449 Da,扩散速率对琼脂浓度高度敏感)的抑菌圈偏差最显著。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA+5% 羊血、MHA(药敏)、MSA |
| 液体 | TSB |
| 温度 | 35±2°C |
| 时间 | 18-24 h |
⚠ KB 法关键:MHA 厚度必须为 4mm(150mm 平板注入 60mL 培养基)——每 ±1mm 厚度变化可导致抑菌圈 ±2mm 漂移。pH 必须为 7.2-7.4——CO₂ 孵育(如苛养菌药敏)会使 MHA 表面酸化——导致氨基糖苷类和四环素类抑菌圈假性缩小。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封 | 1-2 月 |
| TSB+15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年+ |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC COA |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 加入 0.3-0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 转移至 TSA+5% 羊血平板,35±2°C 孵育 18-24h。
- 挑取单菌落配制 0.5 McFarland 菌悬液——用标准 KB 纸片组合验证抑菌圈在 CLSI M100 QC 范围内后投入使用。
纸片扩散法(KB 法)——标准质控
CLSI M100 推荐的 25923 QC 纸片组合(部分精选)
| 抗菌药物 | 纸片含量 | QC 范围(mm) |
| 青霉素 | 10 U | 26-37 |
| 苯唑西林 | 1 μg | 18-24 |
| 头孢西丁 | 30 μg | 23-29(MSSA 确证) |
| 万古霉素 | 30 μg | 17-21 |
| 克林霉素 | 2 μg | 24-30 |
| 复方磺胺 | 1.25/23.75 μg | 24-32 |
25923 + 29213 不能互换使用的根本原因:25923 的抑菌圈 QC 范围是在纸片扩散法的标准化条件下(MHA 4mm 厚度、直接菌落悬液法、35°C 大气孵育 16-18h)建立的——29213 的 MIC QC 范围是在肉汤稀释法(CAMHB、35°C 16-20h)中建立的。两种方法的抗菌药物浓度梯度(纸片扩散 vs 试管梯度)完全不同。
质控应用
纸片扩散法 (KB法) 药敏质控
ATCC 25923 是 CLSI M100 和 EUCAST 指定的纸片扩散法(Kirby-Bauer 法)药敏质控菌株(MSSA)。每周或每批 MHA 配制后应以 25923 做全套抗生素纸片的质控——抑菌圈直径必须落在 CLSI M100 规定的 21 种抗生素的 QC 范围内。25923 与 29213(MIC 法质控 MSSA)的核心区别——25923 用于纸片扩散法(仅抑菌圈直径有 QC 范围)、29213 用于微量肉汤稀释法(仅 MIC 值有 QC 范围)。两者不可互换——纸片扩散法的 QC 参数(抑菌圈直径 mm)和 MIC 法的 QC 参数(mg/L)是两套独立的系统。
MHA 培养基性能验证
每一批次 MHA 配制后必须用 25923 做性能验证——以复方新诺明纸片(1.25/23.75 ug)验证 MHA 中胸腺嘧啶和胸腺嘧啶核苷的含量——若抑菌圈内出现模糊的微量生长(薄雾状而非清晰抑菌圈),提示 MHA 中含有过量胸腺嘧啶——竞争性拮抗 TMP 的作用,导致假耐药。以 25922(大肠埃希菌)无法检测此问题——因为胸腺嘧啶只影响革兰阳性球菌的 TMP-SMX 药敏结果。
常见问题 ============ -->
常见问题
Q: 25923 的头孢西丁抑菌圈从 28mm 缩小到 24mm——有问题吗?
目前仍在 CLSI QC 范围(23-29mm)内——但如果呈持续下降趋势——提示可能正在发生 mecA 基因的异质性表达转变。取同批菌株做 PBP2a 乳胶凝集——若为阴性可排除 mecA 获得。更常见的原因是新批次的 MHA 中胸腺嘧啶或胸苷含量偏高——导致复方磺胺的拮抗效应(非直接原因)或琼脂浓度偏差。
Q: 25923 和 6538 都是 MSSA 金葡菌——可以互换吗?
不可以。25923 是 CLSI M100 验证的纸片扩散法专用质控菌株,6538 是 USP 51/ChP 1121 指定的防腐挑战试验菌株。25923 的抑菌圈 QC 范围在 M100 中有明确规定,6538 无药敏质控数据。同时 25923 的凝固酶产生速度和强度高于 6538——这是试管凝固酶试验鉴别两者最快的方法。
订购信息
| 产品名称 | 金黄色葡萄球菌标准菌株 |
| 拉丁名 | Staphylococcus aureus |
| 保藏中心编号 | ATCC 25923 |
| 参考信息 | MSSA/KB法药敏QC株 |
| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附ATCC检测报告 |
| 存储条件 | 2-8度C避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及 CLSI M100 文件,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Staphylococcus aureus 25923 产品页与检测报告(COA)
- CLSI M100:Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing,现行版本
- CLSI M02:Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests
- EUCAST:纸片扩散法药敏试验方法与折点
- Jorgensen JH & Turnidge JD (2015): Susceptibility test methods—dilution and disk diffusion
- CLSI M23:Development of In Vitro Susceptibility Testing Criteria and QC Parameters