菌株来源与保藏信息
多噬伯克霍尔德菌 ATCC BAA-245(Burkholderia multivorans (Vandamme et al.))是 ATCC 保藏的 BCC 成员菌株之一,BSL-2。该菌株由比利时根特大学 P. Vandamme 团队从囊性纤维化患者呼吸道标本中分离,属于伯克霍尔德菌属中基因组 GC 含量最高的物种之一(~ 67%)。ATCC BAA-245 与 ATCC 25416(洋葱伯克霍尔德菌模式株)和 ATCC BAA-247(新洋葱伯克霍尔德菌)共同构成 USP ⟨60⟩ 指定的 BCC 检测参考菌株三联组合——制药用水系统和非无菌药品的 BCC 检测必须覆盖这三株菌的生长促生能力。多噬伯克霍尔德菌在 CF 患者的慢性呼吸道感染中分离率最高——占 BCC 感染的 40–50%,是 BCC 复合物中最重要的临床致病种之一。
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生物学特性
| 特征 | ATCC BAA-245 表现 |
| 革兰染色 | 阴性短杆菌——直或微弯曲 |
| 氧化酶 | 阳性(延迟反应——> 30 s 显色,区别于铜绿假单胞菌的 10 s 内强阳性) |
| 触酶 | 阳性 |
| 麦康凯生长 | 迟缓生长——48 h 可见小菌落(区别于大肠埃希菌 24 h 大菌落) |
| 蔗糖发酵 | 阴性——BCC 三联中蔗糖阴性的唯一物种,关键鉴别特征 |
| 42°C 生长 | 阴性——区别于铜绿假单胞菌的 42°C 生长能力 |
| 硝酸盐还原 | 阳性(产气) |
| 赖氨酸脱羧酶 | 阳性 |
| 色素 | 无色素产生——区别于洋葱伯克霍尔德菌(25416 产黄绿色非荧光色素) |
| 菌落形态 | TSA 上乳白色、光滑、凸起——外观与大肠埃希菌相似,仅凭菌落形态不可靠区分 |
BCC 三物种的核心鉴别——在 ONPG(β-半乳糖苷酶)反应上三株的差异最大:BAA-245 多噬伯克霍尔德菌 ONPG 阴性,25416 模式株 ONPG 延迟阳性(24–48 h 弱阳性),BAA-247 新洋葱伯克霍尔德菌 ONPG 阳性(6–24 h 强阳性)。在检测实验室的实际操作中,ONPG + 蔗糖 + 麦康凯 48 h 生长三项组合试验可初步定位 BCC 物种。
培养条件与保藏
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、R2A(低营养琼脂——有利于恢复应激状态 BCC)、BCSA(洋葱伯克霍尔德菌选择性琼脂) |
| 液体培养基 | TSB、R2B(低营养肉汤——避免高渗透压对菌株膜蛋白的应激) |
| 温度 | 30–35°C(R2A 上 30°C 优于 35°C——BAA-245 在低温下生长更稳定) |
| 培养时间 | 24–48 h(TSA);48–72 h(R2A/BCSA) |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封 | 1–2 月 |
| TSB + 15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年+ |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3–0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 转移至 TSA + R2A 双平板,30–35°C 孵育 24–48 h。
- 复苏后验证:氧化酶延迟阳性(> 30 s)+ 蔗糖阴性 + 42°C 不生长——三项组合确认为 BAA-245。
质控应用
USP ⟨60⟩ 制药用水 BCC 检测
ATCC BAA-245 是 USP ⟨60⟩ Burkholderia cepacia Complex 检测指定的三株参考菌之一——三联菌株(25416 + BAA-245 + BAA-247)用于验证检测培养基和增菌程序的促生长能力。若 BCC 检测方法只对 25416 进行了促生长验证而未覆盖 BAA-245——ONPG 阴性和蔗糖阴性的多噬伯克霍尔德菌在用含乳糖/蔗糖的显色培养基(如 BCSA)时生长可能比 25416 慢 12–24 h。延迟生长可能导致假阴性——接触时间 72 h 的培养是在 BCC 检测中覆盖 BAA-245 的最低要求。
防腐功效试验(PET)极限挑战
BAA-245 在非无菌水性制剂(如漱口水、鼻腔喷雾)的 PET 挑战中具有独特价值——多噬伯克霍尔德菌对对羟基苯甲酸酯(parabens)的固有耐药性(外排泵介导)使其在含 0.2% 尼泊金甲酯的制剂中仍保持 > 3 log 存活。以 25416 验证的非无菌药品防腐体系在 BAA-245 的挑战下可能出现效力不足——PET 方案中应同时纳入 25416 + BAA-245 双株测试,以确保对 BCC 属内耐药谱多样性的覆盖。
常见问题
Q: BAA-245 和 25416 在 TSA 上怎么区分?
仅凭菌落形态不可靠区分——二者均为乳白色光滑菌落。关键鉴别:(1)色素——25416 在营养琼脂 30°C 48 h 产生黄绿色非荧光色素,BAA-245 不产生;(2)蔗糖——BAA-245 阴性,25416 阳性(产酸);(3)ONPG——BAA-245 阴性,25416 延迟阳性。蔗糖 + ONPG 双阴性初步定位为 BAA-245,需 16S rRNA 测序或 recA 基因 PCR 做终极确证。
Q: 为什么 BAA-245 在 MacConkey 上长得慢?
多噬伯克霍尔德菌对胆盐和结晶紫的耐受性弱于 25416 和 BAA-247——MacConkey 琼脂中的胆盐(1.5 g/L)和结晶紫选择性对 BAA-245 的抑制作用更强。若使用 MacConkey 做纯度验证,BAA-245 应延长培养至 48 h——24 h 内菌落极小(< 0.5 mm)易被漏检。改用 R2A 做纯度验证可避免此问题。
Q: BAA-245 对哪些消毒剂固有耐药?
多噬伯克霍尔德菌携带有 Bcc 特异性 RND 型外排泵(如 CeoB-CeoC 系统),对氯己定(洗必泰)和季铵盐类(苯扎氯铵)的最低杀菌浓度(MBC)比铜绿假单胞菌高 10–50 倍。制药用水系统的消毒验证若仅以铜绿假单胞菌(9027)做挑战菌——存在对 BCC(尤其是 BAA-245)的消毒剂浓度严重低估风险。
订购信息
| 产品名称 | 多噬伯克霍尔德菌标准菌株 |
| 拉丁名 | Burkholderia multivorans |
| 保藏中心编号 | ATCC BAA-245 |
| 参考信息 | 蔗糖阴性 / ONPG 阴性 / USP 60 三联株之一 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告 |
| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- USP ⟨60⟩: Microbiological Examination of Nonsterile Products — Tests for Burkholderia cepacia Complex
- ATCC 官网:Burkholderia multivorans BAA-245 产品页与检测报告(COA)
- Vandamme P et al. (1997): Taxonomy of Burkholderia cepacia complex — International Journal of Systematic Bacteriology
- Mahenthiralingam E et al. (2005): The multifarious, multireplicon Burkholderia cepacia complex — Nature Reviews Microbiology
- Coenye T & Vandamme P (2003): Diversity and significance of Burkholderia species — Environmental Microbiology
- Sutton S & Jimenez L (2012): Challenges with Burkholderia cepacia complex detection — Pharmaceutical Microbiology Forum
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