菌株来源与保藏信息
新洋葱伯克霍尔德菌 ATCC BAA-247(Burkholderia cenocepacia (Vandamme et al.)) 是 ATCC 保藏的 BCC 成员中耐药性最强、毒力最高的物种之一,BSL-2。该菌株分离自囊性纤维化(CF)患者呼吸道,属于 BCC 中最具临床侵袭性的 ET12 流行克隆系——ET12 系在 1980–1990 年代引起过加拿大和英国的 CF 中心间大规模交叉感染暴发。ATCC BAA-247 与 25416 和 BAA-245 构成 USP ⟨60⟩ 指定的三联参考菌株——新洋葱伯克霍尔德菌对多种抗生素(包括复方新诺明——BCC 感染的一线治疗药物)天然耐药或易发展获得性耐药,是对防腐体系和抗生素治疗最具挑战性的 BCC 物种。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC BAA-247 表现 |
| 革兰染色 | 阴性短杆菌——直或微弯曲 |
| 氧化酶 | 阳性(10–30 s 内显色——BCC 三联中反应最快) |
| 触酶 | 阳性 |
| ONPG(β-半乳糖苷酶) | 强阳性(6–24 h 快速显色)——BCC 三联中唯一 ONPG 强阳性的物种 |
| 赖氨酸脱羧酶 | 阳性 |
| 蔗糖发酵 | 阳性——与 BAA-245(蔗糖阴性)形成互补鉴别 |
| 麦康凯生长 | 24 h 可见菌落——生长速度在 BCC 三联中最快 |
| 42°C 生长 | 阴性 |
| 抗生素耐药 | 对复方新诺明(TMP-SMX)和氯霉素的 MIC 通常高于 25416——携带多重耐药外排泵及可诱导 β-内酰胺酶 |
| 菌落形态 | TSA 上乳白色、光滑——30°C 培养 48 h 后边缘可呈轻微不规则褶皱 |
BAA-247 的 ET12 流行克隆系基因组特征——携带BCESM 毒力岛(B. cepacia epidemic strain marker)和 cblA 菌毛基因(cable pilus),后者编码的菌毛(cable pilus)介导新洋葱伯克霍尔德菌与 CF 患者气道上皮细胞的紧密结合——是 BCC 中唯一表达 cblA 的物种。BCESM + cblA 双阳性是 ET12 克隆系的分子标识——在 BCC 暴发调查中用于流行病学分型。
⚠ 特殊生物安全提示:BAA-247 属于 BCC 中致病性最强的物种——对有免疫缺陷或潜在肺部疾病(CF、COPD)的个体构成感染风险。在实验室操作时应严格遵循 BSL-2 规范:生物安全柜中操作、避免气溶胶产生、受污染的实验耗材 121°C 高压灭菌后丢弃。非 CF 患者的健康个体感染风险低——但伤口污染可能导致局部脓肿。
培养条件与保藏
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、BCSA(ONPG 阳性 48 h 呈蓝色菌落——区别于 BAA-245 和 25416)、MacConkey |
| 液体培养基 | TSB、CAMHB(阳离子调节 MHB——药敏试验用) |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 24 h(TSA/MacConkey 上生长旺盛——BCC 三联最快);48 h(BCSA 鉴别) |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封 | 1–2 月 |
| TSB + 15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年+ |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3–0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 划线至 TSA + BCSA 双平板,35±2°C 孵育 24 h。
- 复苏后验证:ONPG 6 h 快速阳性 + 氧化酶阳性 + BCSA 上蓝色菌落——三项组合确认为 BAA-247。复苏后的第二代菌株可用于药敏试验(CAMHB 微量肉汤稀释法——CLSI M45 的伯克霍尔德菌药敏指南)。
质控应用
USP ⟨60⟩ 制药用水 BCC 检测——ONPG 阳性对照
ATCC BAA-247 是 BCC 三联中唯一ONPG 强阳性的菌株(6–24 h 快速显色)——这一特性在 BCC 检测方法中作为ONPG 阳性对照至关重要。制药用水 BCC 检测培养基(BCSA、Oxoid CM1005 等)中 ONPG 指示剂的性能验证必须以 BAA-247 做阳性质控——若 ONPG 底物降解或指示剂失效(BCSA 中溴百里酚蓝在 CO₂ 积累时出现假阳性),可能出现假阴性漏检。每批 BCSA 配制后必须用 BAA-247 验证 ONPG 阳性反应(48 h 蓝色菌落)。
非无菌药品防腐挑战——最严苛的 BCC 测试菌
BAA-247 携带的RND 型多重耐药外排泵系统——尤其是 MexAB-OprM 同源物的过表达——使其对多种防腐剂的 MIC 显著高于 25416 和铜绿假单胞菌。在以 25416 单株验证的防腐体系中可能达标的苯扎氯铵浓度(如 0.01%),在 BAA-247 的挑战下可能出现 2–3 log 的额外存活。FDA 在 2021 年关于非无菌水性药品的指南中已开始将 BCC 复合物(而非单一物种 25416)列为防腐挑战测试菌——BAA-247 作为 BCC 中的高耐药代表,应纳入 PET 方案的极限挑战环节。
订购信息
| 产品名称 | 新洋葱伯克霍尔德菌标准菌株 |
| 拉丁名 | Burkholderia cenocepacia(ET12 流行克隆系) |
| 保藏中心编号 | ATCC BAA-247 |
| 参考信息 | ONPG 强阳性 / BCESM 毒力岛 + cblA / USP 60 三联株之一 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告 |
| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- USP ⟨60⟩: Microbiological Examination of Nonsterile Products — Tests for Burkholderia cepacia Complex
- ATCC 官网:Burkholderia cenocepacia BAA-247 产品页与检测报告(COA)
- Mahenthiralingam E et al. (2000): DNA-Based diagnostic approaches for identification of Burkholderia cepacia complex — Journal of Clinical Microbiology
- Sajjan US et al. (1995): Cable (cbl) type II pili of cystic fibrosis-associated Burkholderia cepacia — Infection and Immunity
- CLSI M45: Methods for Antimicrobial Dilution and Disk Susceptibility Testing of Infrequently Isolated Bacteria — 伯克霍尔德菌药敏折点
- FDA (2021): Microbiological Quality Considerations for Non-Sterile Drugs — Guidance for Industry
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