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ATCC VR-1540 人呼吸道合胞病毒 RSV-A 标准株
ATCC VR-1540 人呼吸道合胞病毒A亚型A2株（BSL-2），EN 14476消毒剂杀病毒效力评价。杭州康氧ATCC原装供应。
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病毒株来源与保藏信息
人呼吸道合胞病毒 A 亚型（Human respiratory syncytial virus A，简称 RSV-A）标准株 ATCC VR-1540（A2 株）是 ATCC 保藏的经典 RSV 实验室参考株，BSL-2。A2 株于 1961 年从澳大利亚墨尔本一名患下呼吸道感染的婴儿体内分离，是全球 RSV 研究中使用最广泛的实验室适应株。A2 株在 HEp-2 细胞中能产生典型的合胞体病变（syncytia formation）——多个感染细胞融合成巨大的多核巨细胞，这是 RSV 感染最特征的细胞病变效应（CPE）。ATCC VR-1540 以冷冻感染细胞培养液形式提供，经 TCID₅₀ 滴度验证（≥10⁴ TCID₅₀/mL），附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。
杭州康氧以 ATCC 原装冷冻保存液形式提供，适用于 RSV 抗病毒药物筛选、中和抗体效价测定（微量中和试验）及消毒剂杀病毒效力评价（EN 14476 + A2）。
病毒学特征
| 特征 | ATCC VR-1540（RSV-A A2） |
|---|---|
| 病毒科 | 肺病毒科（Pneumoviridae），正肺病毒属（Orthopneumovirus） |
| 核酸类型 | 单股负链 RNA（-ssRNA），约 15.2 kb |
| 包膜 | 有包膜（脂质双层 + G/F 糖蛋白突起） |
| 融合蛋白 | F 蛋白（融合前/后构象）——介导病毒-细胞膜融合与合胞体形成 |
| 附着蛋白 | G 蛋白——介导病毒附着于宿主细胞表面硫酸乙酰肝素和 CX3CR1 |
| 亚型 | A 亚型（基于 G 蛋白基因序列差异区分 A/B 亚型） |
| CPE 特征 | 合胞体——HEp-2 细胞感染 3~5 d 后出现多核巨细胞，随后细胞脱落 |
| 最适温度 | 35~37°C；33°C 用于减毒活疫苗株（冷适应）的区分 |
| 对消毒剂的敏感性 | 有包膜病毒——对 70% 乙醇、0.5% 次氯酸钠和季铵盐类消毒剂高度敏感 |
RSV A2 株的 F 蛋白在融合前构象（pre-F）上暴露主要中和抗原位点 Ø 和 V——目前所有进入临床试验的 RSV 疫苗均以 pre-F 为免疫原设计。A2 株的 G 蛋白属于 A 亚型（与 B 亚型的 G 蛋白氨基酸同源性约 53%），G 蛋白的高变异性是 RSV 无法形成持久免疫保护的核心原因——也是亚型间交叉中和活性评估的关键指标。A2 株的 M2-1 和 M2-2 基因调控转录-复制平衡——M2-2 缺失株（如 Delta M2-2 减毒活疫苗候选株）在复制动力学上显著减弱。
培养条件与宿主系统
推荐宿主细胞
| 参数 | 推荐条件 |
|---|---|
| 宿主细胞 | HEp-2（ATCC CCL-23）——首选；HeLa（ATCC CCL-2）——备选 |
| 培养基 | DMEM 或 MEM + 2% 胎牛血清（FBS）——维持液；5~10% FBS——细胞生长液 |
| 接种 MOI | 0.1~1.0 TCID₅₀/细胞——CPE 观察；0.01~0.1——多轮复制动力学 |
| 温度 | 35~37°C（33°C 用于冷适应株） |
| CO₂ | 5% CO₂ |
| CPE 出现时间 | MOI=1.0 时 2~3 d 出现合胞体；MOI=0.01 时 5~7 d |
| 收获时间 | CPE 达到 80~90% 时（约 4~5 d），反复冻融（-80°C/37°C × 3 次）释放细胞内病毒后 3000 × g 离心 10 min 取上清 |
⚠ RSV 增殖的关键注意事项：①RSV 对温度和 pH 极度敏感——病毒收获后应在冰上操作，避免反复冻融超过 3 次（每次冻融丧失约 0.5 log₁₀ 感染性滴度）；②添加 0.5~1% 蔗糖或 0.1% 明胶作为保护剂可显著提高冻存后存活率；③HEp-2 细胞在感染时应处于 70~80% 汇合度——过密导致 CPE 发展缓慢，过疏导致细胞在 CPE 出现前脱落；④RSV F 蛋白的融合活性依赖于细胞表面硫酸乙酰肝素——若传代过程中 HEp-2 细胞硫酸乙酰肝素表达下降（连续传代超过 20 代后常见），病毒吸附效率会显著降低。
质控应用
抗 RSV 药物筛选——微量中和试验
ATCC VR-1540 是 RSV 抗病毒药物筛选的标准攻击病毒。微量中和试验（microneutralization assay）是评价中和抗体和融合抑制剂效力的金标准——将系列稀释的待测抗体/化合物与 100 TCID₅₀ 的 VR-1540 预孵育 1 h（37°C），加入 HEp-2 单层细胞培养 4~5 d，以 CPE 抑制率为终点判定中和效价。A2 株对帕利珠单抗（palivizumab——靶向 F 蛋白抗原位点 II 的单克隆抗体）的 IC₅₀ 约为 0.5~1.5 μg/mL——可作为每次试验的阳性质控参考值。
消毒剂杀病毒效力评价——EN 14476 + A2
EN 14476 是欧盟消毒剂杀病毒效力评价的核心标准。RSV 在该标准中被分类为"有包膜病毒"——代表对消毒剂最敏感的病毒类别。A2 株在 EN 14476 的定量悬浮试验中作为有包膜病毒的代表株：将 10⁵~10⁶ TCID₅₀ 的 VR-1540 暴露于待测消毒剂指定浓度和接触时间后，用稀释-中和法终止消毒反应，在 HEp-2 细胞上测定残留病毒感染性滴度——要求 log₁₀ 减少 ≥ 4（即杀灭 ≥ 99.99%）。RSV 是验证季铵盐类消毒剂的优选病毒株——其对苯扎氯铵（0.05~0.1%）高度敏感。
常见问题
Q: 为什么我复苏的 VR-1540 不产生合胞体？
最常见的原因是HEp-2 细胞状态不佳。HEp-2 细胞的汇合度（70~80%）、传代次数（< 20 代）和血清浓度（维持液 FBS ≤ 2%）都会显著影响合胞体形成。另一个原因是冻融损伤——复苏后若滴度低于 10³ TCID₅₀/mL，需在 HEp-2 上盲传 1~2 代扩增后方可出现典型 CPE。若盲传 2 代仍无 CPE——从 ATCC 原始管重新复苏。
Q: A2 株可以用于 RSV-B 亚型的交叉中和试验吗？
有限适用。A2 株（A 亚型）与 B 亚型之间的交叉中和活性因靶向的抗原位点不同而有较大差异：pre-F 抗体（靶向抗原位点 Ø 和 V）在两个亚型间具有良好的交叉中和活性（IC₅₀ 差异 < 2 倍）；但 G 蛋白抗体几乎无交叉中和活性（因 A/B 亚型 G 蛋白同源性仅 53%）。若需评价疫苗诱导的 B 亚型中和活性——推荐补充 ATCC VR-1580（RSV-B 18537 株）。
Q: VR-1540 和 ATCC VR-26（Long 株）有什么区别？
两者均为 RSV-A 亚型经典实验室株。VR-1540（A2）在 HEp-2 上的 CPE 发展更快（MOI=1 时 2~3 d vs 3~4 d），更适用于高通量药物筛选。VR-26（Long 株）在某些细胞系（如 A549 人肺上皮细胞）上的复制滴度比 A2 高 3~5 倍——适用于需要高滴度病毒收获的实验（如病毒纯化、中和试验）。两者的 F 蛋白氨基酸序列同源性 > 99%——在融合抑制剂评价中可互换使用。
订购信息
| 产品名称 | 人呼吸道合胞病毒 A 亚型标准株 |
|---|---|
| 病毒拉丁名 | Human respiratory syncytial virus A |
| 保藏中心编号 | ATCC VR-1540 |
| 参考信息 | RSV-A A2 株；GenBank: M74568（F 基因） |
| 产品形式 | 冷冻感染细胞培养液（含 DMSO 保护剂），≥ 10⁴ TCID₅₀/mL |
| 存储条件 | -70°C 或液氮气相保存；避免反复冻融 |
如需批量订购或技术咨询，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及相关标准文件（EN 14476），仅供实验室专业人员参考。VR 系列病毒产品的培养和使用需在BSL-2 级生物安全实验室中进行——操作者应接受生物安全培训并遵守《病原微生物实验室生物安全管理条例》。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网：Human respiratory syncytial virus VR-1540 产品页与检测报告（COA）
- EN 14476: Chemical disinfectants and antiseptics — Quantitative suspension test for virucidal activity
- McLellan JS et al. (2013): Structure of RSV fusion glycoprotein trimer bound to a prefusion-specific neutralizing antibody — Science 340:1113-1117
- WHO: RSV Vaccine Development Roadmap（现行版本）
- Collins PL et al. (2013): Fields Virology — Respiratory Syncytial Virus and Metapneumovirus
- 中国药典 3302：外源病毒因子检查法——RSV 作为对照病毒的相关应用
- ATCC 25923 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
- ATCC 25922 大肠埃希菌 Escherichia coli 标准菌株
- ATCC 16404 巴西曲霉（黑曲霉）Aspergillus brasiliensis 标准菌株
- ATCC 10231 白色念珠菌 Candida albicans 标准菌株
- ATCC 27853 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 标准菌株
- ATCC 4617 支气管鲍特杆菌 Bordetella bronchiseptica 标准菌株
- ATCC 6538 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
- ATCC 29213 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
- ATCC 15531 肺炎支原体 Mycoplasma pneumoniae 标准菌株
- ATCC 19115 单核细胞增生李斯特菌 Listeria monocytogenes 标准菌株
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ATCC 25923 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
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ATCC 25922 大肠埃希菌 Escherichia coli 标准菌株
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ATCC 16404 巴西曲霉（黑曲霉）Aspergillus brasiliensis 标准菌株
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ATCC 10231 白色念珠菌 Candida albicans 标准菌株
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ATCC 27853 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 标准菌株
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ATCC 4617 支气管鲍特杆菌 Bordetella bronchiseptica 标准菌株
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ATCC 6538 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
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ATCC 29213 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
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