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ATCC VR-1516 人腺病毒5型 Human adenovirus 5 标准株

简要描述：ATCC VR-1516 人腺病毒5型（BSL-2），EN 14476无包膜病毒代表株，用于消毒剂杀病毒验证。杭州康氧ATCC原装供应。...

更新时间：2026-08-07 22:24:49
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ATCC VR-1516 人腺病毒5型 Human adenovirus 5 标准株

ATCC VR-1516 人腺病毒5型（BSL-2），EN 14476无包膜病毒代表株，用于消毒剂杀病毒验证。杭州康氧ATCC原装供应。

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ATCC标准菌株

详细介绍

病毒株来源与保藏信息

人腺病毒 5 型（Human adenovirus 5，简称 HAdV-5）标准株 ATCC VR-1516（Adenoid 75 株）是 ATCC 保藏的经典腺病毒参考株，BSL-2。该株于 1953 年从一名儿童切除的腺样体（adenoid）组织中分离，是基因治疗和疫苗载体领域全球使用最广泛的腺病毒血清型。HAdV-5 属于人腺病毒 C 种（Human mastadenovirus C），为无包膜二十面体对称的双链 DNA 病毒，基因组约 36 kb。ATCC VR-1516 是野生型 Ad5——E1/E3 区完整——与常见的 E1/E3 缺失型复制缺陷重组 Ad5 载体（如 AdEasy、AdMax 系统）不同：VR-1516 可在常规细胞系（HeLa、HEK293、A549）中自主复制，产生典型 CPE（细胞变圆、葡萄串状聚集、最终脱落）。ATCC VR-1516 以冷冻感染细胞培养液形式提供，经 TCID₅₀ 滴度验证，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。

杭州康氧以 ATCC 原装冷冻保存液形式提供，适用于消毒剂杀病毒效力评价（EN 14476 无包膜病毒代表）、AAV 辅助病毒及腺病毒中和抗体效价测定。

病毒学特征

特征	ATCC VR-1516（HAdV-5 Adenoid 75）
病毒科	腺病毒科（Adenoviridae），人乳腺腺病毒属（Mastadenovirus）
核酸类型	双链线性 DNA（dsDNA），约 35,938 bp（AC_000008.1）
包膜	无包膜——二十面体衣壳（240 个六邻体 + 12 个五邻体 + 纤维突起）
纤维蛋白	Knob 结构域结合柯萨奇-腺病毒受体（CAR）——介导病毒附着
五邻体基	RGD 基序结合整合素 αvβ3/αvβ5——介导病毒内化
血清型	5 型——基于六邻体（hexon）高变区和纤维蛋白 knob 的血清学反应区分
E1 区	完整（野生型）——编码 E1A/E1B 蛋白，调控细胞周期并激活病毒早期转录
CPE 特征	细胞变圆、折光性增强、"葡萄串"状聚集——48~72 h 后脱落
最适温度	37°C
对消毒剂的敏感性	无包膜病毒——对 70% 乙醇和季铵盐类中度至高度耐受——0.5% 次氯酸钠可完全灭活

HAdV-5 的六邻体蛋白高变区（HVR 1~7）含有型特异性中和抗原表位——Ad5 中和抗体的主要靶标。Ad5 在全球人群中的血清阳性率为 40~90%（地域差异显著）——中国成人 Ad5 中和抗体阳性率约 70~80%——这是以 Ad5 为载体的疫苗（如 CanSino 的 Ad5-nCoV 新冠疫苗）面临的主要免疫屏障。VR-1516 作为野生型 Ad5 被广泛用于评价人群中预先存在的 Ad5 中和抗体水平——为 Ad5 载体疫苗的适用人群筛选提供血清流行病学数据。腺病毒是无包膜病毒中对化学消毒剂耐受性最强的代表之一——EN 14476 将其列为"有限杀病毒效力"声明的测试病毒（与有包膜病毒相比要求更长的接触时间或更高的浓度）。

培养条件与宿主系统

病毒收获与保存

CPE 达到 90~100% 时，用细胞刮刀收集细胞+培养上清。
-80°C / 37°C 反复冻融 3 次破裂细胞释放病毒。
3,000 × g 4°C 离心 10 min，取含病毒的上清液。
分装后 -80°C 或液氮气相保存——添加 5~10% 甘油或 0.1% BSA 可显著提高冻存稳定性。

⚠ 腺病毒培养关键点：①腺病毒对pH 敏感——pH < 5.0 可致五邻体基构象变化导致病毒失活——维持液中酚红指示变黄（pH 下降）时应立即更换新鲜培养基；②高 MOI 接种时（MOI > 10），E1A 蛋白诱导的凋亡信号可能在病毒完成复制周期前导致细胞死亡——反而降低病毒产量——推荐 MOI 控制在 5 以下；③HEK293 细胞含有整合的 Ad5 E1 区——能反式互补 E1 缺失型重组载体——但用于扩增野生型 VR-1516 时可能发生 E1 区的同源重组——不推荐用 293 细胞长期传代野生型 Ad5。

质控应用

消毒剂杀病毒效力——EN 14476 无包膜病毒代表

EN 14476 将 VR-1516（HAdV-5）列为无包膜病毒的标准测试株。无包膜病毒因缺乏脂质包膜而对醇类消毒剂（乙醇、异丙醇）和季铵盐类具有天然耐受性。EN 14476 要求：在定量悬浮试验中以 10⁵~10⁶ TCID₅₀ 的 VR-1516 暴露于待测消毒剂后，log₁₀ 减少 ≥ 4。若消毒剂能在 5 min 内对 Ad5 达到此标准——可宣称"有限杀病毒效力"（limited spectrum virucidal activity）；若同时通过有包膜病毒（如 VR-1540 RSV）和无包膜病毒（VR-1516 Ad5）两项测试——可宣称"完全杀病毒效力"（virucidal activity）。Ad5 是验证含氯消毒剂和过氧乙酸杀病毒效力的推荐无包膜病毒模型。

AAV 生产的辅助病毒

野生型 Ad5 是重组 AAV（rAAV）生产的经典辅助病毒——提供 AAV 复制所需的 E1A、E1B、E2A、E4 和 VA RNA 辅助功能。在三质粒转染法（pHelper + pAAV + pTransgene）中——pHelper 质粒包含 Ad5 的 E2A、E4 和 VA 基因——VR-1516 的基因组序列（AC_000008.1）是设计和验证 pHelper 质粒的参考标准。若用辅助病毒法（而非三质粒法）生产 rAAV——VR-1516 是首选辅助病毒——但需在后续纯化中通过 CsCl 梯度离心或碘克沙醇梯度离心将辅助 Ad5 与 rAAV 颗粒分离。

常见问题

Q: VR-1516 和 VR-5 有什么区别？
两者均为 HAdV-5——但 VR-1516（Adenoid 75）是经典实验室适应株——在 HeLa 细胞上已适应超过 60 年——复制滴度通常比 VR-5（Adenoid 75 的低代次版本）高 1~2 log₁₀。若用于中和试验——优先选 VR-1516（滴度更高、CPE 更同步）；若用于病毒-宿主相互作用的基础研究——低代次版本（VR-5）因传代突变累积较少更接近临床分离株。

Q: 消毒剂试验中为什么无包膜病毒的代表选 Ad5 而不是其他肠道病毒？
EN 14476 选择 Ad5（而非柯萨奇或埃可病毒）作为无包膜病毒代表的原因是：①Ad5 对醇类消毒剂的耐受性在无包膜病毒中处于中等水平——比小 RNA 病毒（如 PV-1）更耐受乙醇但比诺如病毒替代株（如 FCV）更敏感——这种"中间表型"使其成为覆盖面最广的无包膜病毒指标；②Ad5 的 CPE（细胞变圆、葡萄串状聚集）非常易于判读——实验重复性好；③Ad5 的 BSL-2 安全级别在普通微生物实验室即可操作——无需 BSL-3 设施。

Q: VR-1516 含有完整的 E1 区——能直接在 HEK293 细胞上传代吗？
技术上可以——但不推荐。HEK293 细胞含 Ad5 E1 区——野生型 Ad5 感染 293 细胞后——其自身的 E1 区与 293 细胞中整合的 E1 区之间可能发生同源重组——产生 E1 区重排的突变病毒（可能在 3~5 代后累积）。用于消毒剂评价和中和试验的 Ad5 应在 HeLa 或 A549 细胞上传代——这些细胞不含 Ad5 E1 区——避免重组风险。

订购信息

产品名称	人腺病毒 5 型标准株
病毒拉丁名	Human adenovirus 5
保藏中心编号	ATCC VR-1516
参考信息	HAdV-5 Adenoid 75；GenBank: AC_000008.1
产品形式	冷冻感染细胞培养液（含 DMSO 保护剂），≥ 10⁴ TCID₅₀/mL
存储条件	-70°C 或液氮气相保存；避免反复冻融

如需批量订购或技术咨询，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。

技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及相关标准文件，仅供实验室专业人员参考。VR 系列病毒产品的培养和使用需在BSL-2 级生物安全实验室中进行——操作者应接受生物安全培训并遵守《病原微生物实验室生物安全管理条例》。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。

参考资料

ATCC 官网：Human adenovirus 5 VR-1516 产品页与检测报告
EN 14476: Quantitative suspension test for virucidal activity — Annex A: Adenovirus type 5 as test virus
Davison AJ et al. (2003): Genetic content and evolution of adenoviruses — J Gen Virol 84:2895-2908
Wickham TJ et al. (1993): Integrins αvβ3 and αvβ5 promote adenovirus internalization — Cell 73:309-319
Mast TC et al. (2010): International epidemiology of human pre-existing adenovirus serotype 5 neutralizing antibodies — Vaccine 28:1888-1893
中国药典 3302：外源病毒因子检查法——腺病毒对照的相关应用

ATCC VR-1540 人呼吸道合胞病毒 RSV-A 标准株

ATCC VR-1838 寨卡病毒 Zika virus 标准株（东非基因型）

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参数	推荐条件
宿主细胞	HeLa（ATCC CCL-2）——首选；A549（ATCC CCL-185）、HEK293（ATCC CRL-1573）——备选
培养基	DMEM 或 MEM + 2% FBS（维持液）；5~10% FBS（生长液）
接种 MOI	1~5 TCID₅₀/细胞——快速 CPE；0.1~0.5——多轮复制
温度	37°C
CO₂	5% CO₂
CPE 时间	MOI=5 时 36~48 h；MOI=0.5 时 72~96 h

ATCC VR-1516 人腺病毒5型 Human adenovirus 5 标准株

ATCC VR-1516 人腺病毒5型 Human adenovirus 5 标准株

推荐宿主细胞

病毒收获与保存

消毒剂杀病毒效力——EN 14476 无包膜病毒代表

AAV 生产的辅助病毒

参考资料

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