菌株来源与保藏信息
白色念珠菌 ATCC 10231（Candida albicans (C.P. Robin) Berkhout）是 ATCC 保藏的一株经典二态性酵母菌标准菌株，BSL-1。该菌株最早分离自人皮肤黏膜感染样本（具体来源记录为支气管真菌病患者痰液），经多代纯化后因其稳定的酵母-假菌丝转换能力和可重复的生长动力学，被全球药典采纳为防腐挑战试验中唯一的酵母菌代表。它同时也是 EN 消毒剂标准和 ISO 化妆品标准中的核心测试菌株。
ATCC 产品形式包括 10231（冻干粉）、10231-PK（加标片）和衍生定量菌株 CRM-10231。其模式菌株基因组已测序（GenBank 登录号 GCA_000182965），染色体倍性为二倍体。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供本菌株，每批次附带 ATCC 检测报告，含 ATCC 批号信息。
生物学特性
ATCC 10231 为二态性酵母菌——在正常培养条件下以卵圆形芽生酵母形式存在（直径 3–6 μm），在营养贫瘠或特定诱导条件下（37°C 血清中）可产生芽管（germ tube）并延伸为假菌丝（pseudohyphae）。这种二态性对防腐挑战试验有直接意义：酵母期的 10231 对防腐剂的敏感性可能不同于假菌丝期——在腐败产品中，白色念珠菌常以假菌丝形式定殖于基质缝隙中，比酵母悬浮态更难被防腐剂清除。
| 特征 | ATCC 10231 表现 |
|---|
| 细胞形态 | 卵圆形至球形酵母细胞（3–6 × 4–10 μm），出芽繁殖 |
| 革兰染色 | 阳性（但革兰染色并非酵母菌鉴定标准方法） |
| 芽管试验 | 阳性——37°C 人或兔血清中 2–3h 形成芽管，是区分白色念珠菌与近平滑念珠菌等相近种的经典床旁试验 |
| 厚膜孢子 | 玉米粉-Tween 80 琼脂（CMA）上 25°C 72h 形成末端厚膜孢子——白色念珠菌的关键鉴别特征 |
| 假菌丝 | 形成（CMA 上 25°C 7 天最明显）；SDA 上 37°C 延长培养也可产生 |
| CHROMagar | 绿色至蓝绿色菌落——区别于热带念珠菌（蓝色）和克柔念珠菌（粉色） |
| 尿素酶 | 阴性 |
| 碳源同化 | 葡萄糖 +、麦芽糖 +、蔗糖 +、乳糖 −、纤维二糖 − |
| 最适温度 | 25–30°C（可在 37°C 生长，但生长速率降低且假菌丝形成加速） |
| 生物膜形成 | 强阳性——聚苯乙烯或聚碳酸酯表面 37°C 48–72h 形成多层生物膜，酵母层上覆假菌丝网 |
在 SDA（沙氏葡萄糖琼脂）上 25°C 培养 48h 形成直径 2–4 mm 的乳白色至奶油色光滑凸起菌落，具特征性酵母气味。在 CHROMagar 念珠菌显色培养基上产生翠绿色菌落（β-己糖胺酶裂解显色底物），可用于菌株纯度快速验证。在 CMA 上 25°C 72h 菌落边缘可见假菌丝延伸入琼脂。
培养条件与保藏方法
复苏步骤
- 取出 ATCC 10231 冻干粉安瓿，室温平衡 10–15 分钟。
- 生物安全柜中，无菌吸管加入 0.3–0.5 mL 无菌 SDB 或生理盐水，轻轻吹打重悬。
- 取悬液接种 SDA 平板（推荐加氯霉素的 SDA 以抑制细菌污染），同时接种 SDB 肉汤管。额外建议接种一支 CHROMagar 平板用于纯度验证。
- 25–30°C 培养 48–72h。初次复苏生长速率略慢于传代后培养——48h 时应可见直径 1–3 mm 菌落。若 72h 未见菌落，检查冻干粉储存条件（是否经历高温或反复冻融）。
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | SDA（沙氏葡萄糖琼脂）、SDA+氯霉素、TSA、CHROMagar（纯度验证）、CMA（产厚膜孢子验证） |
| 液体培养基 | SDB（沙氏葡萄糖肉汤）、TSB（生长速度略慢于 SDB） |
| 温度 | 25–30°C（最适）；37°C 可生长但加速假菌丝和老死 |
| 培养时间 | 48–72 h（初始复苏）；24–48 h（传代后）；肉汤 18–24 h 至 OD₆₀₀≈0.5–0.8 |
| 气体环境 | 需氧 |
| 摇瓶条件 | 150–200 rpm（减少酵母聚集，促进均匀悬浮） |
保藏建议
| 保藏方式 | 条件 | 有效期 |
|---|
| 短期工作菌种 | SDA 斜面 / SDA 平板，2–8°C，每 2 周传代 | 2 周 |
| 中长期冻存 | 15–20% 甘油 SDB 重悬，-70°C 或液氮 | ≥ 3 年 |
| 长期保藏 | 冷冻干燥法 | ≥ 10 年 |
⚠ 挑战试验关键提示：ATCC 10231 在 SDB 中 25°C 震荡培养至 OD₆₀₀≈0.5–0.8（约 18–24h）时处于对数中后期、几乎全部为酵母态——这是防腐挑战接种的最佳时机。若培养超过 48h 或处于静止期，假菌丝比例增加、酵母细胞聚集严重，导致初始接种计数误差增大（RSD 可能超过 30%）。接种前离心洗涤两次（3000 × g、5 min），重悬于含 0.05% Tween 80 的无菌生理盐水以减少细胞聚集。
质控与标准化应用
防腐功效试验——唯一的酵母菌代表
ATCC 10231 在 ChP 1121、USP <51>、EP 5.1.3 和 ISO 11930（化妆品）防腐功效检查中为五菌组合中的酵母菌代表。白色念珠菌的真菌细胞壁以几丁质-β-葡聚糖-甘露糖蛋白复合结构为主，与细菌的肽聚糖细胞壁在化学组成和作用靶点上完全不同。这意味着许多对细菌高效的防腐剂（如卡松 CG、有机酸在低 pH 下）对白色念珠菌的效力可能显著降低——按 USP <51> A 类标准：白色念珠菌在 14d 须达到 ≥ 1 log reduction，28d 须"无增加"（no increase）。常见失败模式：含 0.05% 苯甲酸钠 + 0.05% 山梨酸钾的配方在 pH 5.5 条件下对细菌（6538、9027、8739）在 7d 内达标，但对 10231 在 14d 仅 0.8 log reduction——提示需要增强抗真菌组分（如增加有机酸浓度、降低 pH 或引入抗真菌增效剂）。
消毒剂杀真菌效力
在 EN 13624（医疗器械消毒剂杀真菌/酵母菌定量悬浮试验）和 EN 1650（食品/工业/家用领域消毒剂杀酵母菌试验）中，ATCC 10231 为指定测试菌株。白色念珠菌对醇类（60–80% 乙醇或异丙醇）高度敏感（接触 30s 可达 ≥ 4 log reduction），但对双胍类（氯己定）和季铵盐类的敏感性显著低于细菌——典型结果：4% 氯己定手消毒剂对金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）30s 达 ≥ 5 log reduction，但对 ATCC 10231 需延长至 60–120s 才能达到同等效果。在设计含氯己定的手消毒或表面消毒产品时，必须用 ATCC 10231 验证接触时间，不能以细菌数据外推到酵母。
化妆品与药品微生物检验
在《化妆品安全技术规范》中，霉菌和酵母菌总数测定（≤ 100 CFU/g 或 mL，眼周及黏膜用产品 ≤ 10 CFU）是常规检验项目。ATCC 10231 作为酵母菌阳性对照用于验证 SDA 或孟加拉红培养基的促生长能力以及样品中防腐成分的中和效果。在非无菌药品计数方法适用性中，ATCC 10231 接种 ≤ 100 CFU 至 SDA，25°C 培养应在 5 天内形成可见菌落。
ATCC 10231 vs ATCC 90028 的分工
同为白色念珠菌标准株，ATCC 10231 定位于防腐/消毒挑战（USP <51>、EN 13624），ATCC 90028 定位于抗真菌药敏试验质控（CLSI M27-A3 和 M60 指定 MIC 范围）。10231 未被 CLSI 纳入药敏质控体系——若用 10231 代替 90028 出具氟康唑 MIC 值，结果会被审查机构拒绝。需注意 10231 的 CHROMagar 菌落颜色（绿色）比 90028（蓝绿色偏蓝）略浅——在同时处理两株菌时该特征可用于快速视觉区分。
常见问题与注意事项
Q: 为什么防腐挑战必须单独测酵母菌？
真菌细胞壁（几丁质-β-葡聚糖-甘露糖蛋白）的结构与细菌细胞壁（肽聚糖）完全不同。许多针对细菌的防腐剂作用靶点（如青霉素结合蛋白、细胞膜电位扰动）在真菌中不存在或效率极低。卡松 CG（MIT/CMIT）对铜绿假单胞菌在 5 ppm 即可杀菌，但对白色念珠菌需 10–20 ppm 才达同等效果。不测酵母菌等于对整个真核微生物界——包括霉菌和酵母菌——盲视。
Q: SDB 中生长 3 天后底部有沉淀，是污染吗？
正常。酵母菌在静置液体培养基中自然沉降——这不是污染信号。若怀疑细菌污染，可取沉淀物接种血琼脂或 MacConkey 琼脂（35°C 培养）进行验证。白色念珠菌在血琼脂上 25°C 也生长，但 35°C 下生长速率减慢——若沉淀物在血琼脂 35°C 24h 内出现大量非酵母菌落，才提示污染。
Q: 为什么我的防腐挑战中 10231 在 7d 反而增加了？
这提示 防腐体系对该酵母菌在初始阶段无效——白色念珠菌不仅未被抑制，反而利用产品基质中的营养缓慢增殖。常见于含植物提取物、蛋白或多糖的"天然"化妆品中。若 7d 出现增长，需在配方层面排查：是否防腐剂浓度不足、是否因基质蛋白结合导致游离防腐剂浓度降低、是否防腐剂组合缺乏抗真菌成分。
Q: 10231 和 16404（黑曲霉）都代表真菌——为什么两个都要测？
白色念珠菌（10231）测酵母态（单细胞）对防腐剂的敏感性，巴西曲霉（16404）测霉菌孢子态的耐受性。霉菌孢子壁含黑色素和疏水蛋白层，对化学防腐剂的屏障效应远强于酵母细胞壁——常有产品 10231 在 14d 达标、16404 到 28d 仍未达标的情况。两者不可互相替代。
订购信息
| 产品名称 | 白色念珠菌标准菌株 ATCC 10231 |
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| 拉丁名 | Candida albicans (C.P. Robin) Berkhout |
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| 保藏中心编号 | ATCC 10231 |
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| GenBank 参考 | GCA_000182965（基因组 assembly） |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告 |
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| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M27/M60 文件及现行药典和消毒剂标准，仅供实验室专业人员参考。实际培养条件应结合具体实验体系验证。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。
参考资料
- ATCC 官网：Candida albicans 10231 产品页与质控证书（COA）
- 中国药典（ChP）2020：通则 1121 抑菌效力检查法
- USP <51> Antimicrobial Effectiveness Testing
- ISO 11930: Cosmetics — Microbiology — Evaluation of the antimicrobial protection of a cosmetic product
- EN 13624 / EN 1650 消毒剂杀真菌/酵母菌定量悬浮试验
- CLSI M27-A3 / M60: Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts（ATCC 90028 质控范围）
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