菌株来源与保藏信息
金黄色葡萄球菌 ATCC 12600(Staphylococcus aureus subsp. aureus Rosenbach)是 ATCC 保藏的一株经典凝固酶阳性金黄色葡萄球菌标准菌株,BSL-2。该菌株与 ATCC 6538 同属 MSSA(甲氧西林敏感金葡菌),但 12600 的溶血活性更强——在血琼脂上产生更宽更清晰的 β 溶血环——使其在消毒剂杀菌效力评价和微生物限度检查中作为凝固酶阳性葡萄球菌的补充参考株。ATCC 12600 在 AOAC 960.09(杀菌消毒剂的杀菌和洗涤消毒剂活性)和 BS EN 1276 的补充性测试菌株列表中作为金黄色葡萄球菌的代表菌株之一被引用。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 12600 表现 |
| 革兰染色 | 阳性球菌——葡萄串状或四联排列 |
| 凝固酶 | 阳性(试管法 2-4h 完全凝固)——兔血浆凝固速度比 6538 快约 1h |
| 触酶 | 阳性 |
| 甘露醇发酵 | 阳性——MSA 上黄色菌落 |
| DNase | 阳性 |
| 溶血性 | 强 β 溶血——血琼脂上 24h 溶血环 4-6 mm(比 6538 宽 1-2 mm) |
| 耐热核酸酶 | 阳性——100°C 15min 加热后仍保持核酸酶活性 |
| 青霉素酶 | 弱阳性——青霉素 MIC 约 0.12-0.5 mg/L(介于 6538P 和 6538 之间) |
| 色素 | 金黄色——TSA 37°C 48h 后色素比 6538 更深 |
12600 的强溶血表型源于其 α-溶血素(hla 基因编码——形成七聚体跨膜孔道)的高表达——在血琼脂上 24 h 培养后的溶血环比 6538 和 25923 更宽更透明。这一特性在消毒剂测试中具有实用价值——溶血活性的丧失可作为消毒剂对细菌膜完整性和蛋白分泌功能损伤的快速生物学指标——如果消毒剂亚致死浓度处理后 12600 的溶血环显著缩小——提示消毒剂已对菌体膜蛋白功能造成损伤——即使菌体仍为活菌。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | 血琼脂(β 溶血验证——羊血/兔血均可——兔血溶血环更明显)、TSA、MSA |
| 液体培养基 | TSB、BHI 肉汤 |
| 温度 | 35-37°C |
| 培养时间 | 18-24 h |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| TSA斜面(4°C) | 封口膜密封 | 1-2月 |
| TSB+15%甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入0.3-0.5mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 划线至血琼脂+TSA双平板,35-37°C孵育18-24h。
- 复苏后验证:β溶血强阳性(24h 4-6mm)+凝固酶4h阳性+DNase阳性——确认为12600。
质控应用
消毒剂杀菌效力——AOAC 960.09 金葡代表株
ATCC 12600 在 AOAC 960.09 杀菌消毒剂的杀菌和洗涤消毒剂活性试验中作为金葡菌的代表测试菌株。其强溶血表型使消毒效力评价中增加了一个功能损伤维度的读值——将消毒剂暴露后的复苏菌落接种血琼脂——若溶血环消失或显著减弱——提示消毒剂已造成亚致死损伤——即使菌落计数未显示显著的 log reduction。
微生物限度检查阳性对照
在中国药典通则1105/1106的微生物限度检查中,12600可作为凝固酶阳性葡萄球菌的补充阳性对照——与6538(防腐挑战专用)互补——12600更强的凝固酶活性(4h内完全凝固 vs 6538的4-6h)使凝固酶试验的教学和验证更为直观和快速。
常见问题
Q: 12600和6538在消毒剂测试中有什么区别?
12600 = AOAC 960.09金葡代表株——溶血更强、凝固酶更快——适合需要额外功能损伤读值(溶血活性)的消毒剂评价。6538 = USP 51/ChP 1121防腐挑战五菌之一——全球使用最广泛的金葡菌标准株。在欧盟消毒剂申报(EN 1276)中两者均可使用——在美国AOAC体系中12600是历史参考株。
Q: 12600的溶血环缩小——是菌株退化吗?
α-溶血素的表达受agr群体感应系统调控——在连续传代中agr系统可能因自发突变(agrA/agrC基因的移码突变)而沉默——导致溶血素、蛋白酶等外蛋白分泌显著下降。溶血环缩小至<2mm时——应怀疑agr功能丧失——从冻干粉重新复苏——避免该退化株继续用于消毒剂评价(失去溶血活性意味着膜完整性已改变——消毒剂的杀菌动力学可能不反映正常金葡菌)。
Q: 12600的耐热核酸酶试验怎么做?
耐热核酸酶由nuc基因编码,是金葡菌区别于其他凝固酶阳性葡萄球菌的特征酶。挑一环新鲜培养物悬浮于0.2mL TSB中,沸水浴15min灭活其他热不稳定核酸酶,冷却后加入含0.3%DNA和0.01%甲苯胺蓝的琼脂平板小孔中,37°C孵育2-4h。阳性呈粉红色晕环——DNA被核酸酶水解后甲苯胺蓝由蓝色转为粉红色。12600的耐热核酸酶比6538更强——粉红色晕环直径更大——2h即可判读。
订购信息
| 产品名称 | 金黄色葡萄球菌标准菌株(强溶血型) |
| 拉丁名 | Staphylococcus aureus subsp. aureus |
| 保藏中心编号 | ATCC 12600 |
| 参考信息 | 强β溶血/凝固酶4h/AOAC 960.09金葡代表株 |
| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附ATCC检测报告 |
| 存储条件 | 2-8°C避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- AOAC 960.09: Germicidal and Detergent Sanitizing Action of Disinfectants
- ATCC官网:Staphylococcus aureus 12600产品页与检测报告(COA)
- Bhakdi S & Tranum-Jensen J (1991): Alpha-toxin of Staphylococcus aureus — Microbiological Reviews
- Novick RP (2003): Autoinduction and signal transduction in the regulation of staphylococcal virulence — Molecular Microbiology
- ChP通则1105/1106《非无菌产品微生物限度检查》
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