菌株来源与保藏信息
肠出血性大肠埃希菌 O157:H7 ATCC 43888(Escherichia coli O157:H7 — EHEC)是 ATCC 保藏的一株非产毒(stx₁⁻ stx₂⁻)大肠埃希菌 O157:H7 参考菌株,BSL-2。该菌株虽然具有 O157 的 O 抗原和 H7 的鞭毛抗原——但天然缺失了编码志贺毒素的 stx₁ 和 stx₂ 基因——不产志贺毒素——使其在 BSL-2 实验室中可安全操作而无需 BSL-3 防护。ATCC 43888 在 GB 4789.36《大肠埃希菌 O157:H7/NM 检验》和 ISO 16654 中作为O157 血清学阳性对照菌株——用于验证 O157 乳胶凝集试剂和免疫磁珠分离(IMS)方法的灵敏度和特异性。因 stx⁻ 表型——43888 也可作为 EHEC 检测中 PCR 阴性对照(stx 基因阴性但 O157 血清型阳性)——区别于临床分离的 stx⁺ 菌株。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 43888 (O157:H7 stx⁻) 表现 |
| 革兰染色 | 阴性杆菌 |
| 血清型 | O157:H7——O157 乳胶凝集阳性 |
| 志贺毒素(stx₁/stx₂) | 阴性——PCR stx₁⁻ stx₂⁻ ——区别于临床分离 EHEC(stx⁺) |
| 山梨醇发酵 | 阴性(24-48h 不发酵)——SMAC 上无色菌落——区别于非 O157 大肠埃希菌(山梨醇阳性——粉红色) |
| MUG(β-葡萄糖醛酸酶) | 阴性(无荧光)——O157:H7 群特异性——区别于非 O157 大肠埃希菌(MUG⁺) |
| β-溶血 | 阴性——区别于其他 EHEC(如 O157:H7 EDL933 可产 EHEC 溶血素) |
| 吲哚 | 阳性 |
| SMAC 菌落 | 无色透明——山梨醇不发酵——直径 1-1.5 mm |
ATCC 43888 的 stx₁⁻/stx₂⁻ 表型是其安全性和质控价值的核心。由于不产志贺毒素——在 BSL-2 实验室中操作无需额外的毒素防护——但 O157 和 H7 抗原的完整表达确保其在免疫学检测中与 stx⁺ O157 菌株的行为一致。在山梨醇-MacConkey(SMAC)琼脂上——43888 的无色菌落+ O157 乳胶凝集阳性提供了两重确证——是 O157 检测培训和方法验证的完美阳性模板。
培养条件与保藏
选择性培养体系
| 参数 | 推荐条件 |
| 选择性分离 | SMAC 琼脂(山梨醇 MacConkey 含头孢克肟-亚碲酸钾 CT-SMAC)——无色菌落 |
| 非选择性 | TSA、血琼脂——O157 在非选择性培养基上与普通大肠埃希菌菌落无差异 |
| 温度 | 35-37°C |
| 培养时间 | 18-24 h(TSA);24-48 h(SMAC——山梨醇阴性 48h 后才完全判读) |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封 | 1-2 月 |
| TSB + 15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 划线至 SMAC + TSA 双平板,35-37°C 孵育 24 h。
- 复苏后验证:SMAC 上无色菌落 + O157 乳胶凝集(1 min 内强凝集)+ MUG 阴性——确认为 O157:H7 stx⁻。PCR 验证 stx₁⁻/stx₂⁻。
⚠ 血清型稳定性:O157 的 O 抗原在非选择性连续传代(> 10 代)中可能因 wzy 聚合酶基因的相变异而部分丢失——导致乳胶凝集试验由强凝集转为弱凝集或阴性。若发现凝集反应减弱——立即从冻干粉重新复苏并限传代数在 5 代以内。
质控应用
GB 4789.36 / ISO 16654 O157 检验阳性对照
ATCC 43888 是 GB 4789.36 指定的 O157:H7 阳性对照——检验流程:mEC+n 肉汤(36°C 18-24h 增菌)→ IMS(O157 免疫磁珠捕获)→ CT-SMAC 分离 → O157 乳胶凝集 + MUG 阴性 + 山梨醇阴性——三重确证。43888 的 stx⁻ 表型使其免疫磁珠的捕获效率不受志贺毒素干扰(stx 不表达于细菌表面——不影响 O157 LPS 与 IMS 磁珠的结合)——作为 IMS 试剂的阳性验证菌株具有稳定性和安全性双重优势。
PCR stx 阴性对照
在 EHEC 的多重 PCR 检测中(stx₁ + stx₂ + eaeA + O157 rfbE 四重 PCR),43888 应显示O157 rfbE 阳性 + stx₁/stx₂/eaeA 阴性——作为 PCR 试剂盒的"O157 阳性但非产毒"对照——区别于 EDL933(stx⁺ eaeA⁺——完全阳性对照)。每批次 PCR 试剂盒或引物合成后应以 43888 做四重对照验证 PCR 体系无交叉污染和非特异性扩增。
常见问题
Q: 43888(stx⁻)能替代 stx⁺ 菌株做食品检验阳性对照吗?
可以——43888 在 GB 4789.36 中被指定为 O157 血清学阳性对照——用于 IMS 捕获和 O157 乳胶凝集确证步骤——这两个步骤不依赖于 stx 的表达。但不可替代 stx⁺ 菌株用于 PCR 阳性对照(需要 stx⁺ 信号)——PCR 阳性对照需用 ATCC 43895(EDL933——stx₁⁺ stx₂⁺ eaeA⁺)获得完整的毒力基因阳性信号。
Q: SMAC 上无色菌落是肠杆菌怎么办?
SMAC 上无色菌落不仅只有 O157:H7——其他山梨醇阴性的肠杆菌(如奇异变形杆菌、阪崎肠杆菌的部分菌株)也可产生无色菌落。O157 的确认应不做乳胶凝集直接挑取无色菌落——先做吲哚试验(O157 应为阳性——排除奇异变形杆菌阳性)再乳胶凝集。吲哚阳性 + O157 凝集阳性可大幅增加大肠埃希菌 O157 的确证准确性。
Q: 43888 操作时 BSL-2 防护足够吗?
足够。43888 的 stx₁⁻ stx₂⁻ 经 PCR 和 Vero 细胞毒性生物测定双重确证——不产志贺毒素。在 BSL-2 生物安全柜中按标准肠杆菌科操作规范即可——无需毒素气溶胶防护。但需注意——虽然不产志贺毒素——43888 仍可携带 LEE 毒力岛的残余片段(非完整致病岛——不具功能性 III 型分泌系统)——操作后按 BSL-2 规范洗手和消毒台面。
订购信息
| 产品名称 | 大肠埃希菌 O157:H7 标准菌株(stx⁻) |
| 拉丁名 | Escherichia coli O157:H7 |
| 保藏中心编号 | ATCC 43888 |
| 参考信息 | stx₁⁻ stx₂⁻ / O157 乳胶凝集⁺ / GB 4789.36 阳性对照 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告 |
| 存储条件 | 2-8°C 避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- GB 4789.36-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希菌 O157:H7/NM 检验》
- ISO 16654:2001 Horizontal method for the detection of Escherichia coli O157
- ATCC 官网:Escherichia coli 43888 产品页与检测报告(COA)
- Kaper JB et al. (2004): Pathogenic Escherichia coli — Nature Reviews Microbiology
- Riley LW et al. (1983): Hemorrhagic colitis associated with a rare Escherichia coli serotype — New England Journal of Medicine
- Feng P & Lampel KA (1994): Genetic analysis of uidA expression in EHEC O157:H7 — Applied and Environmental Microbiology
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