菌株来源与保藏信息
ATCC 13030(Streptococcus agalactiae Lehmann and Neumann)即无乳链球菌(Group B Streptococcus,GBS),BSL-2。该菌株是从临床标本中分离的 Lancefield B 群血清学分型参考菌株——GBS 是围产期新生儿感染的首要病原菌——孕妇生殖道携带率约 10-30%,经产道垂直传播可导致新生儿早发型败血症(<7天)、肺炎和脑膜炎——致死率在早产儿中可达 20-40%。ATCC 13030 的 CAMP 试验(Christie-Atkins-Munch-Petersen)阳性——与金黄色葡萄球菌 β-溶血素协同产生箭头状强化溶血区——这是临床微生物室区分 GBS 与其他 β-溶血链球菌的核心表型试验。同时马尿酸钠水解阳性也是 GBS 区别于化脓链球菌(A 群——马尿酸钠阴性)的关键生化鉴别点。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 13030 表现 |
| 革兰染色 | 阳性球菌——链状排列(液体培养中长链更明显) |
| 触酶 | 阴性(链球菌属共性) |
| Lancefield 分群 | B 群——乳胶凝集阳性 |
| 溶血 | 窄 β 溶血——血琼脂上菌落下方可见窄溶血环(部分菌株可呈非溶血性) |
| CAMP 试验 | 阳性——与金葡菌协同产生箭头状强化溶血 |
| 马尿酸钠水解 | 阳性(区别于 A 群化脓链球菌——阴性) |
| PYR | 阴性(区别于 A 群化脓链球菌和肠球菌属——PYR 阳性) |
| 杆菌肽敏感 | 耐药(区别于 A 群化脓链球菌——杆菌肽敏感) |
| 菌落形态 | 5% 羊血 TSA 上 35°C+5%CO₂ 孵育 24h——灰白色小菌落(0.5-1mm)——β 溶血环 |
| 荚膜 | 阳性——富含唾液酸的多糖荚膜——免疫逃逸的主要毒力因子 |
GBS 的荚膜多糖以唾液酸(N-乙酰神经氨酸)为末端残基——其分子结构与人体神经细胞表面的唾液酸化糖蛋白高度相似——这种"分子模拟"使 GBS 能有效逃避宿主的免疫识别。GBS 已鉴定出 10 种荚膜血清型(Ia、Ib、II-IX)——其中 Ia、Ib、II、III 和 V 型占人类侵袭性感染的 95% 以上。ATCC 13030 作为血清学 B 群参考株——在 GBS 疫苗研发中用于验证不同荚膜血清型的交叉保护效果。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
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| 固体培养基 | 5% 脱纤维羊血 TSA、哥伦比亚血琼脂、LIM 肉汤(GBS 选择性增菌) |
| 液体培养基 | THB(Todd-Hewitt Broth)、BHI |
| 温度 | 35°C+5%CO₂ |
| 培养时间 | 24h(血琼脂)——48h 以上菌落变平Β-溶血减弱 |
⚠ CO₂ 孵育需求:GBS 在 5%CO₂ 环境中生长最佳、溶血最典型。大气孵育(0.04%CO₂)条件下 β 溶血显著减弱——部分菌株可能表现为非溶血性——导致在血琼脂初筛时被误判为"非 GBS 链球菌"。没有 CO₂ 孵育箱的实验室——可用烛缸法(candle jar——点燃蜡烛密封罐——残余 O₂ 约 17%+CO₂ 约 3%)替代。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| 血琼脂斜面(4°C) | 封口膜密封 | 1-2 周(链球菌冷藏存活期短) |
| THB+15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封西林瓶 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在 BSL-2 生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL THB,轻轻旋转重悬。
- 转移至 5% 羊血 TSA 平板,35°C+5%CO₂ 孵育 24h。
- 复苏成功后挑取单菌落做 CAMP 试验和马尿酸钠水解确认——同时划线接种含杆菌肽(0.04U)纸片的血平板——确认耐药(区别于 A 群链球菌)。
- THB+15% 甘油 -70°C 冻存。
围产期 GBS 筛查——CAMP 阳性对照
CDC 推荐的 GBS 产前筛查流程中的阳性对照
美国 CDC 推荐所有孕妇在妊娠 35-37 周进行 GBS 产道定植筛查。标准流程:阴道-直肠拭子 → LIM 肉汤增菌 18-24h → 血琼脂/GBS 显色培养基分离 → CAMP 试验 + 乳胶凝集确证。ATCC 13030 作为该流程的全程阳性对照——每种新批次的 LIM 肉汤和血琼脂使用前需用 13030 验证促生长能力和 CAMP 反应的灵敏度。
CAMP 试验标准操作与判读
在 5% 羊血琼脂平板上——沿直径方向划线接种金黄色葡萄球菌(如 ATCC 6538 或 25923——产生 β-溶血素)——在垂直方向上划线接种待测链球菌(距金葡菌线 3-5mm——不接触)。35°C+5%CO₂ 孵育 18-24h 后——GBS 阳性结果表现为两线交汇处形成箭头状透明溶血区。13030 的 CAMP 阳性强度应达到 ≥5mm 的箭头状强化溶血——若 ≤2mm 或无强化——可能为假阴性——确认金葡菌为新鲜复苏 ≤2 代且 β-溶血环清晰可见。
常见问题
Q: CAMP 试验阴性——但马尿酸钠阳性——是不是 GBS?
可能仍是 GBS——CAMP 试验假阴性常见原因:① 金葡菌 β-溶血素产量不足——传代 >3 次的金葡菌 CAMP 因子分泌显著减少。确认使用新鲜复苏 ≤2 代的金葡菌。② 血琼脂平板过干——水分不足影响 CAMP 因子和金葡菌 β-溶血素的扩散——使用新鲜倾注 ≤7 天的血平板。③ 菌量过少——划线时需用菌落直接涂抹(不可用菌悬液——菌量不足)。若 CAMP 始终阴性——补做马尿酸钠水解和乳胶凝集——两项均阳性仍可确认 GBS。
Q: 13030 的 β 溶血在大气孵育下完全消失了——菌株退化了?
非退化——GBS 的 β 溶血素(cylE 基因编码的溶血素/溶细胞素)的表达和活性在 5%CO₂ 条件下显著增强。大气孵育(0.04%CO₂)下——β 溶血素分泌量降低——溶血环可缩小至肉眼不可见。将平板转至 5%CO₂ 孵育箱继续孵育 4-6h——溶血环可部分恢复。日常 GBS 检验必须使用 CO₂ 孵育——大气孵育条件下报告"非溶血性链球菌"是实验室常见误判。
订购信息
| 产品名称 | 无乳链球菌标准菌株 ATCC 13030 |
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| 拉丁名 | Streptococcus agalactiae |
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| 保藏中心编号 | ATCC 13030 |
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| Lancefield 分群 | B 群——CAMP 阳性 / 马尿酸钠阳性 |
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| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附 ATCC 检测报告 |
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| 存储条件 | 2-8°C 避光保存 |
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如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M100 及 CDC GBS 预防指南,仅供实验室专业人员参考。无乳链球菌为 BSL-2 级病原微生物。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Streptococcus agalactiae 13030 产品页与检测报告(COA)
- CLSI M100:链球菌药敏试验 QC 范围,现行版本
- CDC (2010): Prevention of Perinatal Group B Streptococcal Disease
- Christie R et al. (1944): A note on a lytic phenomenon shown by group B streptococci(CAMP 试验原始文献)
- ACOG Committee Opinion No. 797: Prevention of GBS Early-Onset Disease in Newborns
- Lancefield RC (1933): A serological differentiation of human and other groups of hemolytic streptococci