菌株来源与保藏信息
产气荚膜梭菌 ATCC 13124(Clostridium perfringens — Type A)是 ATCC 保藏的一株 A 型产气荚膜梭菌标准菌株,BSL-2。该菌株是产气荚膜梭菌的模式株——在 GB 4789.13 和 ISO 7937 中作为食品检验阳性对照菌株。ATCC 13124 的 α 毒素(磷脂酶 C)产量稳定——在 TSC 琼脂上产生特征性黑色菌落(亚硫酸盐还原为硫化物——与铁离子形成 FeS 黑色沉淀)——是食品检验实验室阳性对照的标准配置。与 ATCC 13985 相比——13124 在 45°C 培养条件下的生长速率更快(倍增时间约 8 min——已知细菌中最快之一),是验证厌氧培养系统性能的加速指示菌。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 13124 表现 |
| 革兰染色 | 阳性粗大杆菌——两端钝圆、芽孢椭圆形次端生 |
| 厌氧性 | 专性厌氧——氧气浓度>0.5%即抑制生长 |
| 卵磷脂酶(α毒素) | 阳性——卵黄琼脂上不透明沉淀带(Nagler反应——抗α毒素血清中和后可逆) |
| 双溶血环 | 血琼脂上内环完全溶血(θ毒素)+外环不完全溶血(α毒素) |
| TSC菌落 | 黑色菌落——亚硫酸盐→硫化物+Fe³⁺→FeS黑色沉淀 |
| 乳糖发酵 | 阳性——产酸产气("暴烈发酵"——TSC深层菌落裂解) |
| 明胶液化 | 阳性 |
| 运动性 | 阴性——区别于其他梭菌属 |
| 最适温度 | 37-45°C——倍增时间仅8-10 min |
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 选择性琼脂 | TSC琼脂(环丝氨酸400mg/L) |
| 液体培养基 | FTM、RCM |
| 温度 | 37°C(常规);45°C(快速鉴别) |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| RCM深层琼脂(4°C) | 厌氧罐保存 | 1-2月 |
| RCM+15%甘油(-70°C) | 冻存管厌氧分装 | 2年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在厌氧工作站/生物安全柜中快速操作——减少空气暴露<5min。
- 用无菌注射器加入0.3-0.5mL预还原RCM——旋转重悬。
- 划线至预还原血琼脂+TSC双平板——37°C厌氧培养18-24h。
- 复苏后验证:双溶血环+卵黄琼脂Nagler反应阳性——确认为产气荚膜梭菌。
质控应用
GB 4789.13 产气荚膜梭菌检验阳性对照
ATCC 13124 是 GB 4789.13 指定的阳性对照菌株——TSC倾注法36±1°C厌氧20-24h后计数黑色菌落。阳性对照回收率应≥50%——排查TSC中环丝氨酸效价是否因长期4°C储存降解。每批TSC配制后以13124做促生长验证。
灭菌验证——中间耐热芽孢挑战
13124芽孢的D121约为0.5-1.5min——介于生孢梭菌(D121 7-15min)和嗜热脂肪芽孢杆菌(D121 2-5min)之间——在湿热灭菌验证的三级挑战体系中作为中间级别的芽孢指示菌。
13124芽孢在食品热加工致死曲线验证中也具有价值——其D100约为0.5-1.5min——可模拟巴氏杀菌后残留的轻度耐热芽孢在冷藏食品中的萌发风险——与生孢梭菌(D121 7-15min——代表严重耐热芽孢)形成完整的芽孢耐热梯度。
常见问题
Q: TSC上黑色菌落不够明显?
三方面排查:亚硫酸盐含量(TSC中Na₂S₂O₅应为0.1%——配制超过2周的平板亚硫酸盐氧化失效);铁离子来源(柠檬酸铁铵0.1%而非FeCl₃——FeCl₃在弱碱性pH下易形成Fe(OH)₃胶体);琼脂深度(TSC倾注法而非涂布法——深层菌落利于厌氧微环境形成和H₂S浓集)。
Q: 13124和13985选哪个?
13124 = 模式株——α毒素产量高——TSC黑色菌落更明显——适合教学和阳性对照。13985 = ATCC保藏的主推株——实验室适应性更好——冻干粉复苏成功率更高。食品检验中优先选13124(模式株——与国标阳性对照的预期表型最吻合)。
Q: 13124的Nagler反应怎么做最标准?
卵黄琼脂平板分两半——左半涂布抗α毒素血清、右半不涂。平板干燥后——在分界线上垂直划线接种13124。37°C厌氧培养24h。左半(含抗毒素)菌落周围无沉淀带(α毒素被中和)、右半(无抗毒素)菌落周围出现不透明沉淀带——形成明显的"半抑制"模式——确证α毒素的特异性。
订购信息
| 产品名称 | 产气荚膜梭菌标准菌株(模式株) |
| 拉丁名 | Clostridium perfringens(Type A) |
| 保藏中心编号 | ATCC 13124 |
| 参考信息 | 模式株/α毒素⁺/GB 4789.13阳性对照/TSC黑色菌落 |
| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附ATCC检测报告 |
| 存储条件 | 2-8°C避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- GB 4789.13-2012《产气荚膜梭菌检验》
- ATCC官网:C. perfringens 13124产品页与检测报告(COA)
- Rood JI & Cole ST (1991): Molecular genetics of C. perfringens — Microbiological Reviews
- McClane BA (2001): C. perfringens — ASM Press
- Labbe RG (2013): C. perfringens in Guide to Foodborne Pathogens
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息及相关标准文件,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。