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/ 产品分类 点击展开+屎肠球菌 ATCC 15305(Enterococcus faecium (Orla-Jensen) Schleifer and Kilpper-Balz)是 ATCC 保藏的一株万古霉素敏感(VSE)屎肠球菌标准菌株,BSL-2。该菌株是肠球菌药敏质控的万古霉素敏感参考株——在 CLSI M100 中被指定为肠球菌药敏试验的质控菌株,与 ATCC 51299(VanA 型 VRE,万古霉素耐药)配对使用。ATCC 15305 在高浓度庆大霉素(500 mg/L)和链霉素(2000 mg/L)筛选试验中为HLAR 阴性(无高水平氨基糖苷耐药)——使其成为完整肠球菌药敏质控体系的阴性对照参考株。屎肠球菌的耐药率(尤其万古霉素耐药率 VRE)在过去 20 年从 < 1% 上升至 20–40%(中国 CHINET 监测数据),15305 作为历史 VSE 参考株在耐药趋势研究中具有基线价值。
| 特征 | ATCC 15305 表现 |
|---|---|
| 革兰染色 | 阳性球菌——成对或短链排列(镜下与链球菌不可区分,需 PYR 试验鉴别) |
| PYR(吡咯烷酮酶) | 阳性——肠球菌属的快速鉴别试验(A 群链球菌也为 PYR 阳性——需额外 6.5% NaCl 生长鉴别) |
| 6.5% NaCl 生长 | 阳性——区别于链球菌(< 6.5% NaCl 生长) |
| 胆汁七叶苷 | 阳性——肠球菌属在含 40% 胆汁的七叶苷琼脂上变黑 |
| 触酶 | 阴性(区别于葡萄球菌) |
| Lancefield D 群 | 阳性 |
| 阿拉伯糖发酵 | 阳性——屎肠球菌与粪肠球菌的关键鉴别(粪肠球菌阿拉伯糖阴性) |
| 动力 | 阴性 |
| 万古霉素 MIC | ≤ 1 mg/L(VSE 表型)——vanA/vanB 基因 PCR 阴性 |
| HLAR | 阴性——庆大霉素 500 mg/L 和链霉素 2000 mg/L 筛选均无生长 |
| 菌落形态 | 血琼脂上灰白色、光滑、圆形——α 溶血或 γ 溶血(不溶血) |
屎肠球菌(E. faecium)与粪肠球菌(E. faecalis)是临床标本中最常见的两种肠球菌——两者在外观和生化反应上极为相似。核心鉴别点:(1)阿拉伯糖——屎肠球菌阳性、粪肠球菌阴性;(2)亚碲酸钾耐受——粪肠球菌耐受(0.04% 亚碲酸钾琼脂上生长并产黑色菌落)、屎肠球菌敏感;(3)运动性——两者均阴性(区别于鹑鸡肠球菌和铅黄肠球菌的运动性阳性)。三项鉴别组合的准确率 > 95%,剩余 < 5% 的非典型菌株需 MALDI-TOF 或 16S rRNA 测序确证。
| 参数 | 推荐条件 |
|---|---|
| 固体培养基 | 血琼脂(哥伦比亚血琼脂——α 或 γ 溶血)、TSA、胆汁七叶苷琼脂(确证培养基) |
| 液体培养基 | TSB、BHI 肉汤、CAMHB(阳离子调节 MHB——药敏试验) |
| 温度 | 35±2°C(可在 10–45°C 宽温域生长——耐热性优于链球菌) |
| 培养时间 | 18–24 h |
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|---|---|
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封 | 1–2 月 |
| TSB + 15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC 检测报告 |
ATCC 15305 在 CLSI M100 中被指定为肠球菌药敏试验的 VSE 敏感参考株——万古霉素纸片扩散法(30 μg)质控范围为 20–22 mm,万古霉素微量肉汤稀释法 MIC 质控范围为 0.5–2 mg/L。每批药敏试验应同时运行 15305(VSE 敏感对照)和 51299(VRE 耐药对照——vanA 阳性、万古霉素 MIC ≥ 32 mg/L)——敏感株和耐药株的万古霉素纸片抑菌圈差异应 ≥ 15 mm(15305 的 ≥ 17 mm vs 51299 的 ≤ 14 mm)。若两者抑菌圈差异 < 10 mm,提示万古霉素纸片或 MHA 批次问题。
ATCC 15305 在高浓度庆大霉素(500 mg/L BHI 肉汤或含 120 μg/片的庆大霉素纸片)和链霉素(2000 mg/L 或 300 μg/片)的 HLAR 筛选试验中均为阴性——BHI 肉汤中 35°C 培养 24 h 后不生长或仅有微量生长、纸片周围不出现任何抑菌圈(即无生长)。HLAR 阴性是肠球菌联合治疗(β-内酰胺 + 氨基糖苷)有效的前提——若 15305 的 HLAR 筛选出现假阳性(非特异性生长),排查 BHI 肉汤中庆大霉素浓度是否因降解低于 450 mg/L——可换用新鲜配制的 HLAR 筛选肉汤重试。
Q: 15305 和 29212 都是肠球菌——怎么选择用哪个?
15305 是屎肠球菌 VSE——主要用于万古霉素敏感性验证(与 VRE 耐药株配对)、阿拉伯糖阳性鉴别验证和 HLAR 阴性对照。29212 是粪肠球菌 VSE——主要用于粪肠球菌特有的药敏质控(如达托霉素——CLSI 指定 29212 而非 15305 作为达托霉素质控株)和亚碲酸钾耐受验证。若实验室只备一株肠球菌质控株——优先考虑 29212(CLSI M100 推荐),若需万古霉素敏感/耐药对验证——15305 + 51299(VRE)或 15305 + 700221(VanB 型 VRE)组成配对体系。
Q: 阿拉伯糖发酵试验不典型怎么办?
常规生化管中的阿拉伯糖发酵试验在屎肠球菌某些菌株中可能出现延迟阳性(> 48 h 变色)——这与肠球菌的兼性厌氧代谢和阿拉伯糖操纵子(araBAD)的调控有关。建议:(a)接种量加大——用 0.5 McFarland 菌悬液 1–2 滴接种而非一接种环;(b)培养时间延长至 48 h 并每日观察——24 h 阴性、48 h 弱阳性仍判为屎肠球菌;(c)用市售 API 20 Strep 或 VITEK 2 GP 鉴定卡复核——生化的计算机辅助判读比肉眼判断更客观。
Q: 15305 传代后万古霉素 MIC 升高——是 VSE 变成了 VRE 吗?
不是——在无万古霉素选择压力下的传代不可诱导 vanA/vanB 基因的获得。若观察到万古霉素 MIC 从 1 mg/L 升至 2–4 mg/L(仍在 VSE 范围内),更可能的是:(a)CAMHB 中二价阳离子浓度异常——Ca²⁺/Mg²⁺ 偏高可轻微降低万古霉素与其 D-Ala-D-Ala 靶点的结合亲和力而导致 MIC 升高 1–2 个稀释度;(b)菌株传代过度——外膜蛋白的改变导致万古霉素的通透性轻微下降。若 MIC 升至 ≥ 8 mg/L(VRE intermediate)——应怀疑菌株交叉污染——取一支新的冻干粉重新复苏并做 PCR 确证 vanA/vanB 阴性。
| 产品名称 | 屎肠球菌标准菌株(VSE) |
|---|---|
| 拉丁名 | Enterococcus faecium |
| 保藏中心编号 | ATCC 15305 |
| 参考信息 | vanA⁻/vanB⁻ VSE / CLSI M100 指定QC株 / HLAR阴性 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告 |
| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
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