菌株来源与保藏信息
铜绿假单胞菌 ATCC 15442(Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula)是 ATCC 保藏的一株环境分离铜绿假单胞菌标准菌株,BSL-2。该菌株是 EN 1040 和 EN 1276 消毒剂悬浮试验中指定的铜绿假单胞菌标准测试菌株——在欧洲消毒剂法规体系中与 ATCC 6538(金葡菌)共同构成消毒剂杀菌效力评价的革兰阴性/阳性双菌核心体系。ATCC 15442 的生物膜形成能力较强——在 EN 13697(表面消毒剂载体试验)和 AOAC 消毒剂效力测试中作为不锈钢载体生物膜模型的参考菌株。与 9027 和 27853(同为铜绿假单胞菌)的核心区别——15442 为环境分离株(非临床菌株)——对消毒剂的耐受谱更接近环境中铜绿假单胞菌的实际水平——而非临床分离株(可能有获得性耐药机制干扰)。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 15442 表现 |
| 革兰染色 | 阴性杆菌——直或微弯曲、单在或成对排列 |
| 氧化酶 | 阳性(10 s 内强阳性) |
| 色素 | 绿脓色素(pyocyanin)——蓝绿色 + 荧光色素(pyoverdine)——紫外灯下黄绿色荧光 |
| 42°C 生长 | 阳性——区别于其他非发酵革兰阴性菌 |
| 鞭毛 | 单端单鞭毛——运动性极强 |
| 葡萄糖氧化 | 氧化型(O-F 试验——开放管产酸) |
| 精氨酸双水解酶 | 阳性 |
| 硝酸盐还原 | 阳性(产气) |
| 生物膜形成 | 强——比 9027 和 27853 在聚苯乙烯表面的生物膜生物量高 1.5-2 倍(结晶紫 OD570) |
| 菌落形态 | TSA 上扁平、不规则边缘、金属光泽——特征性葡萄样气味(2-氨基苯乙酮) |
ATCC 15442 的绿脓色素产量高且稳定——在 Pseudomonas Agar P(King's A 培养基)上色素产量可达肉眼可见的蓝绿色——这一特征在消毒剂中和试验中非常有价值——色素可以做菌株纯度的快速目视判断(如消毒剂暴露后复苏菌落是否仍为蓝绿色)。
培养条件与保藏
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、Pseudomonas Agar P(色素验证)、Cetrimide 琼脂(选择性分离) |
| 液体培养基 | TSB、胰蛋白胨大豆肉汤——消毒剂中和试验中建议添加 0.1% Tween 80(减少菌体聚集) |
| 温度 | 35-37°C(30°C 色素产量最佳——消毒剂试验中标准为 35-37°C) |
| 培养时间 | 18-24 h |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
| TSA 斜面(室温) | 封口膜密封——4°C 可能加速绿脓色素氧化褪色 | 1-2 月 |
| TSB + 15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 划线至 TSA + Cetrimide 琼脂双平板,35-37°C 孵育 18-24 h。
- 复苏后验证:氧化酶阳性(10s)+ Pseudomonas Agar P 上蓝绿色色素 + 42°C 生长阳性——确认为铜绿假单胞菌。
质控应用
消毒剂杀菌效力评价——EN 1040/EN 1276 格兰阴性菌核心株
ATCC 15442 是 EN 1040 悬浮试验和 EN 1276 定量悬浮试验中指定的铜绿假单胞菌测试菌株。在 EN 1276 标准测试条件下(0.3% 牛白蛋白干扰物、20°C、5 min 接触时间),消毒剂必须对 15442 达到 ≥ 5 log₁₀ reduction 才可宣称"杀菌"。15442 的生物膜形成能力使其在模拟实际使用场景(如医院环境表面、医疗器械清洗后残留生物膜)中比 9027 更接近现实——仅用 9027 验证的消毒剂在实际使用中可能因生物膜保护效应而效力不足。
AOAC 消毒剂效力——载体试验(Germicidal Spray Test)
在 AOAC 961.02 杀菌喷雾试验中,15442 接种不锈钢载体后干燥——消毒剂喷雾后回收——必须在 60 个载体中 ≥ 59 个无菌生长。该试验模拟医院环境表面的消毒——15442 在干燥的不锈钢表面(48 h 干燥后存活率约 20-40%)对消毒剂的耐受性在生物膜干燥过程中进一步增加。
常见问题
Q: 15442、9027、27853——消毒剂评价该选哪个?
15442 = EN 标准消毒剂测试专用株——环境来源、生物膜强、绿脓色素产量高——适合消毒剂上市前的法规依从性测试。9027 = 防腐挑战五菌之一(USP 51/ChP 1121)——非发酵菌代表——适合化妆品和药品的防腐功效试验。27853 = 药敏质控株(CLSI M100)——适合临床抗生素耐药监测。三者不可互换——欧盟消毒剂申报必须以 15442 数据为准。
Q: 消毒剂中和试验中 15442 生物膜干扰怎么办?
15442 在悬浮试验中(EN 1040/1276)——本身不易形成生物膜(浮游菌)——生物膜问题主要存在于载体试验(EN 13697)和干燥试验(AOAC)中。若悬浮试验中出现"假阳性生长"——优先排查中和剂的稀释度不足(残留消毒剂对复苏菌的亚致死损伤造成延迟生长——48 h 后才出现菌落——而非中和剂本身不工作)。增加中和剂稀释倍数(如在 Letheen 肉汤中做 10⁻¹-10⁻³ 系列稀释后涂板计数)可区分真阳性(各稀释度均生长)与中和剂效力不足(仅低稀释度生长)。
Q: 15442 传代后绿脓色素消失——菌株退化了吗?
绿脓色素的合成受群体感应系统(PQS——2-庚基-3-羟基-4-喹诺酮信号分子)调控——在非选择性连续传代(> 10 代)中 PQS 信号分子积累不足可导致色素表达下调。这不等于菌株退化——色素消失的菌株对消毒剂的敏感谱无实质性变化。恢复色素:将色素消失的菌株接种于 Pseudomonas Agar P(King's A)平板——30°C 培养 48 h——色素通常可恢复。若 Pseudomonas Agar P 上仍无色素——才确认为色素合成缺陷变种——应从冻干粉重新复苏。
订购信息
| 产品名称 | 铜绿假单胞菌标准菌株(消毒剂测试专用) |
| 拉丁名 | Pseudomonas aeruginosa |
| 保藏中心编号 | ATCC 15442 |
| 参考信息 | EN 1040/EN 1276 指定测试株 / 环境分离 / 生物膜强形成 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告 |
| 存储条件 | 2-8°C 避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- EN 1040: Chemical disinfectants — Quantitative suspension test for basic bactericidal activity
- EN 1276: Chemical disinfectants — Quantitative suspension test for food/industrial/domestic use
- ATCC 官网:Pseudomonas aeruginosa 15442 产品页与检测报告(COA)
- AOAC 961.02: Germicidal Spray Products as Disinfectants
- Maillard JY (2013): Mechanisms of bacterial resistance to biocides — International Biodeterioration & Biodegradation
- Bridier A et al. (2011): Biofilm-associated persistence of food-borne pathogens — Food Microbiology
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