菌株来源与保藏信息
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 ATCC 33591(Staphylococcus aureus subsp. aureus — MRSA)是 ATCC 保藏的一株HA-MRSA(医院获得性 MRSA)标准菌株,BSL-2。该菌株携带 mecA 基因——编码青霉素结合蛋白 PBP2a——导致对所有 β-内酰胺类抗生素(包括耐酶青霉素和碳青霉烯类)固有耐药。ATCC 33591 属于 SCCmec I 型(I 型葡萄球菌染色体盒 mec——最早发现的 mec 基因元件类型),是 MRSA 参考株中基因组背景最清晰的菌株之一。在 CLSI M100 中被指定为MRSA 头孢西丁筛选阳性质控菌株——与 ATCC 25923(MSSA)和 ATCC BAA-1705(MRSA SCCmec II)构成 MRSA 检测的三级参考体系。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 33591 (MRSA) 表现 |
| 革兰染色 | 阳性球菌——葡萄串状排列 |
| 凝固酶 | 阳性(试管法 4h) |
| 触酶 | 阳性 |
| mecA 基因 | 阳性——PBP2a 乳胶凝集试验阳性(Oxoid PBP2' 试剂盒) |
| 苯唑西林 MIC | ≥ 4 mg/L(耐药)——MSSA(如 29213)MIC ≤ 2 mg/L(敏感) |
| 头孢西丁纸片(30 μg) | 抑菌圈 ≤ 21 mm(耐药)——CLSI M100 折点 |
| SCCmec 型别 | I 型——仅携带 mecA——不携带其他耐药基因(区别于 II/III 型多重耐药 MRSA) |
| 万古霉素 MIC | ≤ 1 mg/L(VSSA 敏感——可用于万古霉素纸片扩散法的敏感对照) |
| 菌落形态 | TSA 上金黄色光滑菌落——与 MSSA 无可分辨的形态差异 |
33591 的 SCCmec I 型 使其成为 mec 基因型最"纯净"的 MRSA 参考株——仅携带 β-内酰胺耐药决定因子——不干扰非 β-内酰胺类药敏试验的 QC。这对于 CLSI 的 MRSA 筛选验证至关重要——头孢西丁纸片筛选的是 meca 基因的表达而非其他耐药机制的交叉影响。
培养条件与保藏
常规培养
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、血琼脂、MHA(药敏)、MRSA 显色琼脂(如 ChromID MRSA——粉红色菌落确证) |
| 液体培养基 | TSB、CAMHB(药敏 MIC) |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 18-24 h |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封冷藏 | 1-2 月 |
| TSB + 15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 划线至血琼脂 + MRSA 显色琼脂双平板,35±2°C 孵育 18-24 h。
- 复苏后验证:头孢西丁纸片(30 μg)抑菌圈 ≤ 21 mm + PBP2a 乳胶凝集阳性——确认为 MRSA。每季度验证 mecA 未丢失。
⚠ mecA 丢失风险:在无抗生素选择压力的连续传代中——SCCmec 元件可能因同源重组而自发切除(curing)。若发现头孢西丁抑菌圈从 ≤ 21 mm(耐药)升至 ≥ 22 mm(敏感边缘)——提示 mecA 丢失——立即废弃并从冻干粉重新复苏。
质控应用
CLSI MRSA 头孢西丁筛选阳性质控
ATCC 33591 是 CLSI M100 指定的 MRSA 筛选阳性质控菌株——头孢西丁纸片(30 μg)筛选法——MHA 35°C 24 h 培养后抑菌圈应 ≤ 21 mm。每批次药敏试验应同时运行 33591(MRSA 阳性对照)和 25923(MSSA 阴性对照——抑菌圈 ≥ 22 mm)。二者的头孢西丁抑菌圈差异应 ≥ 3 mm——若 < 2 mm——提示 MHA 批次中 NaCl 浓度或胸腺嘧啶含量异常。
消毒剂抗性评价——MRSA 补充挑战株
在医院环境表面消毒剂的效力验证中,33591 代表的 MRSA 对部分消毒剂的耐受性可能与 MSSA 略有差异——甲氧西林耐药与消毒剂耐药之间无直接交叉耐药——但 MRSA 菌株在医院环境中暴露于亚致死浓度的消毒剂残留的概率更高——可能诱导外排泵上调。在以 6538(MSSA)验证的消毒程序基础上——增加 33591 作为补充挑战株,提高 MRSA 高流行病房的消毒方案可靠性。
常见问题
Q: 33591 和 BAA-1705 都是 MRSA——有什么区别?
33591 = HA-MRSA SCCmec I 型——经典 mecA 阳性、不携带其他耐药决定因子的"单药耐药"MRSA 参考株——适合头孢西丁筛选法的基础 QC。BAA-1705 = HA-MRSA SCCmec II 型——除 mecA 外还携带多个耐药基因(tet、erm 等)——多重耐药表型——适合 MRSA 鉴定试剂盒的综合性能验证(显色琼脂 + PBP2a 乳胶 + PCR)。
Q: MRSA 显色琼脂上 33591 菌落颜色变淡——是 mecA 丢失吗?
不一定。MRSA 显色琼脂中的显色底物(通常为 X-Glu 或磷酸酶底物)的裂解依赖于菌株的糖苷酶表达而非 mecA——33591 在连续传代中可能因糖苷酶活性的表型漂移导致显色减弱。确证 mecA 状态的金标准是头孢西丁纸片抑菌圈——而非显色强度。显色减弱但头孢西丁耐药(≤ 21 mm)——mecA 仍阳性——正常使用。
Q: 33591 对氯己定的 MIC 比 MSSA 高——这是交叉耐药吗?
不是交叉耐药。部分 MRSA 菌株(包括 33591)携带的qacA/B 基因编码多药外排泵——对季铵盐类(苯扎氯铵)和双胍类(氯己定)的最低杀菌浓度比 MSSA 高 2-4 倍。这在 MRSA 中是常见的质粒编码表型——与 mecA 无关(许多 MSSA 也可携带 qac 基因)。消毒剂效力验证若仅以 MSSA 做挑战——应意识到 MRSA 菌株对氯己定和季铵盐的耐受性可能更高——HAI(医院获得性感染)高发科室应优先验证含 qac 基因的 MRSA 株的消毒效果。
订购信息
| 产品名称 | 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)标准菌株 |
| 拉丁名 | Staphylococcus aureus — MRSA |
| 保藏中心编号 | ATCC 33591 |
| 参考信息 | mecA⁺ SCCmec I型 / 头孢西丁R / CLSI M100 MRSA筛选阳性质控 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告 |
| 存储条件 | 2-8°C 避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- CLSI M100: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing — MRSA 头孢西丁筛选折点
- ATCC 官网:Staphylococcus aureus 33591 产品页与检测报告(COA)
- Katayama Y et al. (2000): A new class of genetic element, Staphylococcus cassette chromosome mec, encodes methicillin resistance — Antimicrobial Agents and Chemotherapy
- Deurenberg RH & Stobberingh EE (2008): The evolution of Staphylococcus aureus — Infection, Genetics and Evolution
- Monecke S et al. (2011): A field guide to pandemic, epidemic and sporadic clones of MRSA — PLoS ONE
- Skov R et al. (2006): Evaluation of cefoxitin disc diffusion for MRSA detection — Journal of Antimicrobial Chemotherapy
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及相关标准文件,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。