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/ 产品分类 点击展开+流感嗜血杆菌 ATCC 27370(Haemophilus influenzae (Lehmann and Neumann) Winslow et al.)是 ATCC 保藏的一株无荚膜型(NTHi,nontypeable)流感嗜血杆菌标准菌株,BSL-2。该菌株不表达荚膜多糖——与 b 型流感嗜血杆菌(Hib,如 ATCC 10211)不同——使其成为研究非分型流感嗜血杆菌致病机制和苛养菌药敏试验的参考菌株。ATCC 27370 在 CLSI M45《苛养菌药敏试验方法》中被列为嗜血杆菌属药敏质控的参考菌株。无荚膜型流感嗜血杆菌是成人社区获得性肺炎、COPD 急性加重和中耳炎的重要病原——在非 Hib 疫苗覆盖人群中的致病比例逐年上升。
| 特征 | ATCC 27370 表现 |
|---|---|
| 革兰染色 | 阴性小球杆菌——多形性,可呈球杆状、丝状(营养贫乏时) |
| 荚膜 | 无荚膜(NTHi)——印度墨汁染色阴性、荚膜肿胀试验阴性、PCR bexA 基因阴性 |
| X 因子(血红素) | 必需——卟啉试验阴性(自身不能合成血红素) |
| V 因子(NAD) | 必需——卫星现象阳性(在金黄色葡萄球菌菌落周围生长旺盛) |
| 氧化酶 | 阳性 |
| 触酶 | 阳性 |
| β-内酰胺酶 | 阴性——氨苄西林敏感(BLNAR 阴性) |
| 溶血性 | 巧克力琼脂上不溶血(区别于溶血嗜血杆菌) |
| 菌落形态 | 巧克力琼脂上灰色、透明、扁平——湿润光泽的"露滴状"菌落,有鼠臭味(吲哚阳性) |
| CO₂ 需求 | 5–10% CO₂ 促进初次分离生长——但非绝对必需(区别于淋病奈瑟菌) |
流感嗜血杆菌的培养是微生物学实验室的基本功考验——X+V 双因子需求意味着普通血琼脂(羊血中的 V 因子在加热裂解红细胞前不可利用)上不生长,仅巧克力琼脂(加热裂解释放 V 因子)上可见菌落。卫星现象是鉴定嗜血杆菌属的经典试验——将待检菌密涂于不含 V 因子的琼脂,在中央点种金黄色葡萄球菌(ATCC 25923),37°C 5% CO₂ 培养 24 h 后仅在金葡菌菌落周围出现卫星菌落。NTHi 菌株由于无荚膜——菌落比 Hib 更扁平透明——初次分离时在巧克力琼脂上极易被经验不足的检验员漏检。
| 参数 | 推荐条件 |
|---|---|
| 固体培养基 | 巧克力琼脂(加热羊血琼脂)——释放 V 因子并补充 X 因子;HTM(嗜血杆菌试验培养基,药敏专用) |
| 分离/增菌 | 巧克力琼脂 + 杆菌肽(300 mg/L)——抑制共生菌群,提高呼吸道标本中嗜血杆菌的检出率 |
| 温度 | 35±2°C |
| CO₂ | 5–10% CO₂(烛缸法或 CO₂ 培养箱) |
| 培养时间 | 24–48 h(巧克力琼脂);16–20 h(HTM 药敏试验——CLSI M45 规定) |
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|---|---|
| 巧克力斜面(室温) | 封口膜密封——4°C 冷藏加速死亡 | 1 周(苛养菌不可久放) |
| 脱脂牛奶 + 15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻——含血红素和 NAD 的冻存液 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见 ATCC 检测报告 |
ATCC 27370 在 CLSI M45《苛养菌药敏试验方法》中被指定为嗜血杆菌属的参考质控菌株。HTM 微量肉汤稀释法——氨苄西林的 MIC 质控范围为 0.25–1 mg/L(敏感)、复方新诺明的质控范围为 0.12/2.4–0.5/9.5 mg/L。27370 由于 β-内酰胺酶阴性——在氨苄西林药敏中为敏感参考株——与产 β-内酰胺酶的嗜血杆菌(如 ATCC 49247,BLPAR)在氨苄西林 MIC 上的差异可达 16–64 倍。药敏试验的每批试验必须同时运行 27370(敏感对照)和 49247(耐药对照)。
每批巧克力琼脂配制后必须以 27370 做促生长验证。接种 10³–10⁴ CFU 后 35°C CO₂ 培养 20–24 h,菌落数应 ≥ 理论接种量的 70%。若低于 50%——排查三方面:(1)羊血加热温度不足(应 80°C 15 min——温度过高 V 因子破坏、过低红细胞裂解不完全);(2)琼脂中血红蛋白铁含量——不同品牌羊血的 V 因子含量可差异 2–3 倍;(3)琼脂倾倒后放置 > 7 天——V 因子氧化降解。
Q: 27370(NTHi)和 Hib(b 型荚膜株)的最关键区别是什么?
荚膜有无——直接决定抗生素选择和治疗策略的区别。NTHi 菌株无荚膜疫苗靶点——Hib 结合疫苗对 NTHi 无交叉保护。致病谱差异:Hib 主要导致侵袭性疾病(脑膜炎、菌血症、会厌炎——<5 岁儿童),NTHi 导致黏膜表面感染(中耳炎、鼻窦炎、COPD 急性加重——成人和儿童均可)。在药敏试验中——NTHi 菌株的整体抗生素敏感率低于 Hib——尤其氨苄西林(产 TEM-1 型 β-内酰胺酶的比例在 NTHi 中为 25–35%,Hib 中为 10–15%)。
Q: 卫星现象阴性——但巧克力琼脂上生长良好——是嗜血杆菌吗?
可能不是。卫星现象阴性提示该菌可以自身合成 V 因子(NAD 从头合成途径完整),不属于嗜血杆菌属——应考虑奈瑟菌属(淋病奈瑟菌和脑膜炎奈瑟菌均为卫星现象阴性)或副猪嗜血杆菌以外的巴斯德菌科成员。卫星现象阳性是嗜血杆菌属(Haemophilus)的必要条件之一——若二氧化碳需求强(CO₂ 培养箱外不生长)+ 卫星现象阴性,优先怀疑淋病奈瑟菌。
Q: 27370 传代几次后生长变慢——是衰退了吗?
可能且常见。无荚膜流感嗜血杆菌在体外连续传代中 X 因子受体(HxuABC 系统)和 V 因子依赖性脱氢酶的表达量会逐渐下调——导致对培养基中血红素和 NAD 的利用效率下降。建议:(1)传代次数限制在 5 代以内——超过 5 代从冻干粉重新复苏;(2)每次传代后在巧克力琼脂上观察菌落大小——若 24 h 菌落直径 < 1 mm(正常应为 1.5–2 mm),表明传代过度——立即重开新支复苏。
| 产品名称 | 流感嗜血杆菌标准菌株(无荚膜型) |
|---|---|
| 拉丁名 | Haemophilus influenzae(NTHi) |
| 保藏中心编号 | ATCC 27370 |
| 参考信息 | 无荚膜(bexA⁻)/ X+V双因子必需 / CLSI M45苛养菌药敏QC株 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告 |
| 存储条件 | 2–8°C 避光保存 |
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