菌株来源与保藏信息
铜绿假单胞菌 ATCC 27853(Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula)是全球临床微生物实验室药敏试验中使用频率最高的非发酵革兰阴性菌质控菌株。1970 年代从血液培养样本中分离,后被 ATCC 收录并纳入 CLSI M100 体系。与 ATCC 9027(防腐挑战株)的区别在于:27853 的外排泵(MexAB-OprM)基础表达水平较低且不携带任何获得性耐药基因,这使得其对氨基糖苷类和氟喹诺酮类的 MIC 值稳定落在质控范围中段,非常适合药敏质控。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 27853 表现 |
| 革兰染色 | 阴性杆菌,单端单鞭毛 |
| 氧化酶 | 阳性 |
| 42°C 生长 | 阳性 |
| 色素 | 绿脓素+荧光素(Pseudomonas Agar P 上明显) |
| 耐药基因 | 不携带碳青霉烯酶、ESBL、16S rRNA 甲基化酶 |
| 外排泵 | MexAB-OprM 基础表达(无过表达突变) |
| OprD 孔蛋白 | 完整表达(对亚胺培南正常敏感) |
| 最适温度 | 35±2°C |
铜绿假单胞菌 ATCC 27853 是非发酵革兰阴性菌药敏试验的参考质控菌株——与肠杆菌科质控株 25922 不同,27853 代表了一类具有完全不同细胞壁通透性的细菌群体。铜绿假单胞菌的外膜通透性仅为大肠埃希菌的约 1/100——主要由 OprD 孔蛋白介导的碳青霉烯类摄入和 MexAB-OprM 外排泵介导的药物排出共同决定了其对抗生素的天然敏感性水平。27853 对氨苄西林、头孢噻肟和复方磺胺天然耐药——这些"应该耐药"的预期结果是区别 27853 和意外污染菌的最快方法。ATCC 27853 在全基因组测序中已确认为不携带碳青霉烯酶基因——因此可作为碳青霉烯类药敏的阴性对照。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、MHA(Mueller-Hinton 琼脂,药敏试验强制) |
| 液体培养基 | TSB、MHB(阳离子调节型,CAMHB) |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 18–24 h(TSA 上形成典型金属光泽菌落) |
⚠ 药敏关键:铜绿假单胞菌对阳离子浓度极其敏感——氨基糖苷类和粘菌素的 MIC 在 CAMHB 中因 Ca²⁺/Mg²⁺ 浓度的微小差异可波动 2–4 倍。必须使用阳离子调节型 MHB(CAMHB:Ca²⁺ 20–25 mg/L,Mg²⁺ 10–12.5 mg/L),不得用普通 MHB 替代。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封冷藏 | 1-2 个月 |
| TSB+15% 甘油(-70°C) | 冻存管,液氮速冻后转 -70°C | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封西林瓶 | 见 ATCC 检测报告标注有效期 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 将菌悬液全部转移至 TSA 斜面或平板,35±2°C 孵育 18-24h。
- 复苏成功后挑取单菌落在 MHA 平板上划线——确认菌落形态和纯度。
- 取过夜培养的纯菌落配制 0.5 McFarland 菌悬液,接种 MHA 药敏平板——与 CLSI M100 中列出的 QC 范围核对,确认菌株对抗生素的 MIC 值在允许范围内,方可投入日常质控使用。
药敏质控应用
CLSI M100 指定质控范围
| 抗菌药物 | 纸片法抑菌圈(mm) | MIC(μg/mL) |
| 庆大霉素 | 16–21 | 0.5–2 |
| 阿米卡星 | 18–26 | 1–4 |
| 环丙沙星 | 25–33 | 0.25–1 |
| 头孢他啶 | 22–29 | 1–4 |
| 亚胺培南 | 20–28 | 1–4 |
| 哌拉西林-他唑巴坦 | 25–33 | 1–8 |
| 多粘菌素(粘菌素) | — | 0.5–4 |
ATCC 27853 vs ATCC 9027 分工
27853 是药敏质控株(CLSI M100),用于验证每批药敏板的性能。耐药基因阴性、外排泵正常表达、OprD 完整——这些特征使其 MIC 值稳定在质控范围中央。9027 是防腐挑战株(USP <51>),用于验证防腐体系的杀菌效力。两者的法规应用场景完全不重叠,选错会导致方法偏离。
常见问题
Q: 27853 的庆大霉素 MIC 偏高怎么办?
铜绿假单胞菌氨基糖苷类 MIC 对CAMHB 阳离子浓度敏感——Ca²⁺/Mg²⁺ 偏低会导致 MIC 虚高。检查 MHB 是否为阳离子调节型,必要时用原子吸收光谱验证。若更换 CAMHB 后仍未恢复,排查接种悬液浓度是否偏低(低于 0.5 McF 导致初始菌量不足,表观 MIC 偏高)。
Q: 为什么我的 27853 对亚胺培南抑菌圈突然变小了?
ATCC 27853 在连续传代 > 10 次后可能自发产生 OprD 孔蛋白缺失突变,导致对碳青霉烯类药物的敏感性降低(MIC 升高、抑菌圈缩小)。这是铜绿假单胞菌的已知特性——解决方案:从冻存管开启新一支 0 代冻干粉复苏新鲜工作菌种,限制传代次数在 5 代以内。
Q: 多粘菌素 MIC 必须用肉汤稀释法吗?
是的。CLSI/EUCAST 明确规定多粘菌素 MIC 不得用纸片扩散法或梯度扩散法(Etest)替代——多粘菌素大分子在琼脂中扩散差,纸片法和 Etest 的假敏感率可达 30–40%。必须使用肉汤微量稀释法(BMD),且需添加表面活性剂(0.002% Tween 80)防止多粘菌素粘附于微孔板塑料表面。
Q: 27853 对亚胺培南的 MIC 漂移了怎么办?
27853 对亚胺培南的 CLSI QC 范围为 1-4 μg/mL。若出现漂移(偏高),首先检查 MHA 中的锌离子浓度——锌浓度低于 0.5 mg/L 时,某些碳青霉烯类对铜绿假单胞菌的 MIC 会异常升高(锌作为 MBL 酶的辅因子缺失使检测窗口偏移)。同时确认亚胺培南纸片或 E-test 条未过期——碳青霉烯类在潮湿环境中极易水解失活。
订购信息
| 产品名称 | 铜绿假单胞菌标准菌株 ATCC 27853 |
| 拉丁名 | Pseudomonas aeruginosa (Schroeter) Migula |
| 保藏中心编号 | ATCC 27853 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告(COA) |
| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M100 文件以及现行药典标准,仅供实验室专业人员参考。药敏试验结果受培养基品牌、接种量、孵育条件和判读方式等多种因素影响——不同实验室间的 MIC 值在 ±1 个二倍稀释度内的波动属于方法学可接受的变异范围。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Pseudomonas aeruginosa 27853 产品页与检测报告(COA)
- CLSI M100:Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing,现行版本
- EUCAST:EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms,多粘菌素 MIC 测定方法
- FDA-CDER:Antibacterial Susceptibility Test Interpretive Criteria
- Li XZ et al. (2015): Role of MexAB-OprM efflux pump in P. aeruginosa intrinsic resistance
- CLSI M07:Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests