菌株来源与保藏信息
多形拟杆菌 ATCC 29741(Bacteroides thetaiotaomicron (Distaso) Castellani and Chalmers)是 ATCC 保藏的一株厌氧革兰阴性杆菌标准菌株,BSL-2。该菌株是人体肠道菌群中最主要的糖分解厌氧菌——是研究肠道微生物组碳水化合物代谢的模式生物。多形拟杆菌的基因组编码超过 250 个糖苷水解酶——是目前已知原核生物中糖类代谢基因最多的物种——使其在益生元(低聚果糖、低聚半乳糖)体外发酵模型和肠道微生态学研究中作为不可替代的参考菌株。ATCC 29741 在 CLSI M11 中被列为脆弱拟杆菌群药敏质控的补充参考菌株。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 29741 表现 |
| 革兰染色 | 阴性多形性杆菌——圆端、可呈球杆或丝状 |
| 厌氧性 | 专性厌氧 |
| 胆汁耐受 | 耐受20%胆汁——BBE琼脂上水解七叶苷呈黑色 |
| 糖苷水解酶 | >250个——已知原核生物中最丰富的糖类代谢基因 |
| 靛基质 | 阳性——区别于脆弱拟杆菌(靛基质阴性) |
| 卡那霉素/万古霉素 | 双耐受——脆弱拟杆菌群共同特征 |
| 基因组 | 6.26 Mb——编码约4,800个蛋白 |
多形拟杆菌是人类肠道微生物组的"多糖代谢引擎"——其糖苷水解酶的多样性和表达调控的精密程度显著超越脆弱拟杆菌(约 180 个糖苷水解酶——是多形拟杆菌的 70%)。这一遗传特征使 29741 成为研究膳食纤维和益生元在肠道中被微生物代谢转化为短链脂肪酸(乙酸、丙酸、丁酸)机制的首选模型菌株。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 非选择性 | 厌氧血琼脂(Brucella血琼脂+维生素K1+血红素) |
| 选择性 | BBE琼脂 |
| 液体 | BHI(预还原)——可补充0.1%低聚果糖模拟肠道碳源 |
| 温度 | 35-37°C厌氧48h |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
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| 血琼脂斜面(4°C) | 厌氧罐 | 1-2周 |
| BHI+15%甘油(-70°C) | 冻存管厌氧分装 | 2年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
- 在厌氧工作站中快速操作——空气暴露<3min。
- 加入0.3-0.5mL预还原BHI肉汤——旋转重悬。
- 划线至厌氧血琼脂+BBE双平板——35-37°C厌氧48h。
- 复苏后验证:BBE上黑色菌落+卡那霉素/万古霉素耐受+靛基质阳性——确认为多形拟杆菌。
质控应用
肠道微生态——益生元体外发酵模型
ATCC 29741 在益生元体外发酵评价中作为拟杆菌门的代表菌株——其利用低聚果糖(FOS)和低聚半乳糖(GOS)的能力是评判益生元选择性促进有益菌(拟杆菌门+双歧杆菌门)而非兼性厌氧菌(肠杆菌科)的核心指标。多形拟杆菌将FOS代谢为乙酸和丙酸的产率约为10-15 mM/OD单位——此数值在体外模型中用于校准益生元发酵产物的短链脂肪酸预期产量。
常见问题
Q: 29741和25285的区别?
29741 = 多形拟杆菌——靛基质阳性——糖代谢最丰富——肠道微生态和益生元研究的首选。25285 = 脆弱拟杆菌——靛基质阴性——临床厌氧菌药敏质控首选。两者的卡那霉素/万古霉素/胆汁三重耐受一致——在BBE上均呈黑色菌落——需靛基质区分。
Q: 益生元发酵试验中短链脂肪酸产量偏低?
多形拟杆菌的FOS利用依赖于sus-like多糖利用位点——其转录受碳源丰富度的严格调控。在富BHI条件下——FOS的代谢被碳代谢物阻遏(catabolite repression)抑制——短链脂肪酸产量偏低。降低BHI浓度至1/4或使用厌氧基础盐培养基(ABSM+FOS 0.5%)作为发酵基质——解除碳代谢阻遏——FOS的代谢通量可提高2-3倍。
Q: 29741培养中出现了非厌氧菌污染怎么办?
多形拟杆菌对卡那霉素和万古霉素双重耐受——在BBE琼脂上可抑制大多数兼性厌氧菌。若在BBE上出现非黑色的小菌落,将污染菌落在厌氧和需氧条件下分别划线——仅厌氧条件下生长的黑色菌落才是29741。需氧也生长的是污染菌——应从冻干粉重新复苏。若反复出现污染,排查厌氧罐密封性和厌氧产气袋是否失效。
订购信息
| 产品名称 | 多形拟杆菌标准菌株 |
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| 拉丁名 | Bacteroides thetaiotaomicron |
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| 保藏中心编号 | ATCC 29741 |
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| 参考信息 | 靛基质⁺/糖苷水解酶>250/益生元体外发酵模型 |
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| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附ATCC检测报告 |
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| 存储条件 | 2-8°C避光保存 |
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参考资料
- ATCC官网:B. thetaiotaomicron 29741产品页与检测报告(COA)
- Xu J et al. (2007): A genomic view of the human-B. thetaiotaomicron symbiosis — Science
- Sonnenburg JL et al. (2005): Glycan foraging in vivo by B. thetaiotaomicron — Science
- El Kaoutari A et al. (2013): The abundance and variety of CAZymes in the human gut microbiota — Nature Reviews Microbiology
- Flint HJ et al. (2012): Microbial degradation of complex carbohydrates in the gut — Gut Microbes
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