菌株来源与保藏信息
空肠弯曲菌标准株 ATCC 33291(Campylobacter jejuni subsp. jejuni)是 ATCC 保藏的经典微需氧弯曲菌参考株,BSL-2。33291 属于空肠弯曲菌的典型菌株——具备微需氧生长(5% O₂ + 10% CO₂ + 85% N₂)、42°C 嗜热生长和特征性螺旋状运动(极生单鞭毛)三大核心表型——是GB 4789.9 和 ISO 10272-1 食品中空肠弯曲菌检验的阳性对照菌株。33291 的马尿酸盐水解阳性(区别于结肠弯曲菌的马尿酸阴性)是空肠弯曲菌种的确认试验。ATCC 33291 以冻干粉(0 代原装)形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
33291 的马尿酸盐水解阳性、氧化酶阳性和42C嗜热生长三特征也是验证弯曲菌选择性培养基(CCDA)抑制肠道杂菌能力的同时不抑制目标菌生长的常用方法。每批新制备的CCDA应以33291接种验证在42C 24h内出现典型金属光泽蔓延生长。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,适用于 GB 4789.9/ISO 10272 阳性对照、微需氧培养系统性能验证及弯曲菌培养基(CCDA/mCCDA)批次质控。
生物学特性
| 特征 | ATCC 33291 |
| 革兰染色 | 阴性弯曲杆菌——S 形、螺旋形、海鸥翼形 |
| 运动性 | 阳性——极生单鞭毛——暗视野显微镜下可见特征性钻头样运动 |
| 微需氧 | 5% O₂ + 10% CO₂ + 85% N₂——大气氧(21%)抑制生长 |
| 嗜热性 | 42°C 生长良好——37°C 生长较慢——25°C 不生长 |
| 氧化酶 | 阳性 |
| 触酶 | 阳性 |
| 马尿酸盐水解 | 阳性——空肠弯曲菌的关键鉴别试验 |
| H₂S | TSI 不产 H₂S——醋酸铅试纸弱阳性 |
| 萘啶酸/头孢菌素 | 萘啶酸敏感——头孢菌素耐药 |
空肠弯曲菌是全球细菌性胃肠炎最常见的病原体——主要通过未煮熟的禽肉(尤其是鸡肉)传播。33291 在 42°C 的嗜热性和微需氧生长是区分其与肠道中其他弯曲菌样革兰阴性螺旋菌的核心特征。马尿酸盐水解试验(快速马尿酸盐试纸法——2 h 判读)对空肠弯曲菌的特异性 > 98%——马尿酸阳性 + 42°C 生长 + 氧化酶阳性三重试验可确认空肠弯曲菌。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | CCDA(木炭头孢哌酮脱氧胆酸琼脂)、mCCDA、Campy-CVA 琼脂、血琼脂 |
| 液体培养基 | Bolton 肉汤(增菌)、BHI 肉汤 |
| 温度 | 42 ± 1°C(嗜热——37°C 备用但生长慢) |
| 气体条件 | 微需氧——5% O₂ + 10% CO₂ + 85% N₂(CampyGen 产气袋或三气培养箱) |
| 培养时间 | CCDA 上 42°C 24~48 h |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3~0.5 mL Bolton 肉汤或 BHI 肉汤,轻轻旋转重悬。
- 转移至 CCDA 或血琼脂平板,42°C 微需氧(CampyGen 产气袋或三气培养箱 5% O₂:10% CO₂:85% N₂)孵育 24~48 h。
- 复苏后验证典型菌落形态——CCDA 上呈灰白、扁平、有金属光泽的蔓延生长——马尿酸盐水解阳性确认为空肠弯曲菌。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| 斜面(4C) | 封口膜密封 | 1-2月 |
| 15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年+ |
| 冻干粉(4C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
质控应用
GB 4789.9 / ISO 10272——食品检验阳性对照
ATCC 33291 是 GB 4789.9 和 ISO 10272-1 指定的空肠弯曲菌检验阳性对照菌株。在食品检验流程中——Bolton 肉汤增菌(42°C 24~48 h 微需氧)→ CCDA 选择性分离(42°C 48 h)→ 生化鉴定(马尿酸盐水解+氧化酶)——每一步都需以 33291 作为阳性对照验证培养基批次和培养系统性能。33291 的 42°C 生长是验证微需氧培养系统温度和气密性的常规方法——若 33291 不生长——首先排查培养箱/产气袋的 O₂ 含量是否 > 10%(厌氧指示条不变色不保证正确的微需氧条件)。
常见问题
Q: 33291 在普通培养箱(21% O₂)中能生长吗?
不能。空肠弯曲菌是专性微需氧菌——21% O₂ 条件下产生过量的活性氧自由基(超氧化物及过氧化氢)超过其超氧化物歧化酶和过氧化氢酶修复能力——导致细胞膜脂质过氧化死亡。CampyGen 产气袋可将密封罐内 O₂ 降至约 5%——若产气袋失效(指示剂不变色——触感不发热),33291 将完全不长。
Q: 33291 的马尿酸盐水解试验偶尔出现假阴性——为什么?
最常见原因是接种量过少——马尿酸盐水解酶为胞内酶——需足量菌体(约 10⁹ CFU/mL 的浓菌悬液)才能检测。从 CCDA 上刮取约 10 μL 菌环的菌苔重悬于 0.4 mL 1% 马尿酸钠溶液中——37°C 水浴 2 h 后加入茚三酮试剂——紫色出现为阳性。菌量不足(仅用 1~2 个菌落)是假阴性最常见原因。
订购信息
| 产品名称 | 空肠弯曲菌标准株 |
| 拉丁名 | Campylobacter jejuni |
| 保藏中心编号 | ATCC 33291 |
| 参考信息 | 微需氧 / 42°C 嗜热 / GB 4789.9 阳性对照 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息 |
| 存储条件 | 2~8°C 避光保存 |
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 GB 4789.9、ISO 10272、CLSI 标准及相关文献,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Campylobacter jejuni 33291 产品页
- GB 4789.9-2014:食品中空肠弯曲菌检验
- ISO 10272-1: Microbiology of the food chain — Detection and enumeration of Campylobacter
- Fitzgerald C et al. (2016): Campylobacter — Clinical Microbiology Reviews update
- Bolton FJ et al. (1988): CCDA medium for isolation of Campylobacter