菌株来源与保藏信息
耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准株 ATCC 43300(Staphylococcus aureus subsp. aureus)是 ATCC 保藏的经典 MRSA 参考株,BSL-2。43300 的 mecA 基因位于SCCmec II 型葡萄球菌盒式染色体上——与 HA-MRSA(医院获得性 MRSA)的典型基因型一致。ATCC 43300 的核心特征是:头孢西丁耐药(MIC ≥ 8 mg/L)+ 苯唑西林耐药(MIC ≥ 4 mg/L)——但对万古霉素、利奈唑胺和达托霉素敏感——是 CLSI M100 推荐的 MRSA 头孢西丁筛选试验和 PBP2a 乳胶凝集试验的阳性质控菌株。ATCC 43300 以冻干粉(0 代原装)形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,适用于 CLSI 头孢西丁筛选、PBP2a 检测阳性质控及消毒剂对 MRSA 的杀灭效力评价。
生物学特性
| 特征 | ATCC 43300(MRSA) |
| 革兰染色 | 阳性球菌,葡萄串状排列 |
| 凝固酶 | 阳性(试管法+玻片法双阳性) |
| 触酶 | 阳性 |
| 溶血性 | β 溶血(完全溶血环——宽、透明) |
| mecA 基因 | 阳性——编码 PBP2a(青霉素结合蛋白 2a——对 β-内酰胺类亲和力极低) |
| SCCmec 型 | SCCmec II 型(HA-MRSA 特征) |
| 头孢西丁 MIC | ≥ 8 mg/L(耐药——CLSI 折点 ≤ 4 mg/L 敏感) |
| 万古霉素 MIC | 0.5~2 mg/L(敏感——CLSI 折点 ≤ 2 mg/L 敏感) |
| 菌落形态 | TSA 35°C 24 h:金黄色、圆形凸起、光滑、β 溶血宽环 |
ATCC 43300 的 mecA 编码 PBP2a——一种对所有 β-内酰胺类抗生素(青霉素类、头孢菌素类、碳青霉烯类)亲和力极低的转肽酶——当正常的 PBPs(PBP1~4)被 β-内酰胺抑制后——PBP2a 接管细胞壁肽聚糖交联功能——维持金葡菌存活。43300 的 SCCmec II 型盒约 53 kb——除 mecA 外还携带多种抗生素耐药基因——包括 ermA(红霉素耐药——MLS_B 表型)、aadD(妥布霉素/卡那霉素耐药)和 tetK(四环素耐药)。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、血琼脂、MRSA 选择性琼脂(含头孢西丁 4 mg/L + 5% 羊血) |
| 液体培养基 | TSB、CAMHB(药敏试验) |
| 温度 | 35 ± 2°C(勿超过 37°C——高温可抑制 mecA 表达 |
| 培养时间 | 18~24 h |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3~0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 转移至 TSA 平板或血琼脂,35 ± 2°C 孵育 18~24 h。
- 复苏后在含 30 μg 头孢西丁纸片的 MHA 平板上划线验证耐药表型——抑菌圈直径 ≤ 21 mm 确认为 MRSA 表型。
⚠ 传代注意事项:SCCmec II 在非选择性培养基上连续传代 15~20 代后可能发生 mecA 基因的剪切丢失——导致 MRSA 逆转为 MSSA。推荐每 5 代在头孢西丁(4 mg/L)选择性培养基上验证耐药表型。若出现头孢西丁敏感(抑菌圈 ≥ 22 mm)的菌落——从冻干粉重新复苏。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| TSA斜面(4C) | 封口膜密封 | 1-2月 |
| TSB+15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年+ |
| 冻干粉(4C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
质控应用
CLSI M100——头孢西丁筛选阳性质控
ATCC 43300 是 CLSI M100 指定的头孢西丁纸片扩散法 MRSA 筛选阳性质控菌株——每批 MHA 平板和头孢西丁纸片(30 μg)在投入临床使用前必须以 43300 验证:抑菌圈直径 ≤ 21 mm 确认 MRSA 耐药表型可被正确检出。同时用 ATCC 25923(MSSA——头孢西丁敏感——抑菌圈 ≥ 22 mm)作为阴性质控——43300/25923 配对是 MRSA 检测试剂批次验证的标准组合。
PBP2a 乳胶凝集试验阳性质控
43300 的 PBP2a 表达量比 BAA-1705(SCCmec II,但 mecA 表达调控不同)更高——在 Oxoid PBP2a 乳胶凝集试剂盒中 3~5 min 内出现强阳性凝集(+++)——适合作为 PBP2a 检测试剂的快速阳性质控。阴性对照用 25923(MSSA——不产生 PBP2a——乳胶凝集阴性)。
常见问题
Q: 43300 和 BAA-1705 都是 MRSA——有什么区别?
43300 的 PBP2a 表达量更高(乳胶凝集 +++ vs ++)且耐药表型更稳定(传代 15~20 代 mecA 仍保留——BAA-1705 约 10~12 代开始出现 mecA 丢失)。43300 适合常规临床微生物室 MRSA 检测试剂 QC;BAA-1705 的 SCCmec II 盒结构更完整(含完整 IS431 和 Tn554 元件)——适合 MRSA 分子流行病学和 SCCmec 分型研究。
Q: 43300 的万古霉素 MIC 有漂移风险吗?
43300 的万古霉素 MIC 在 0.5~2 mg/L(敏感范围)内高度稳定——连续传代 50 代未见 MIC 漂移至 > 2 mg/L(原因:43300 不含 vanA/vanB 基因——且细胞壁增厚型 VISA 突变在 SCCmec II 型 MRSA 中发生率极低)。但若用于万古霉素筛选试验的质控——推荐同时使用 ATCC 29213(MSSA——万古霉素质控标准株)作为 MIC 法的平行对照。
Q: 43300对达托霉素敏感吗?
达托霉素MIC 0.25-1 mg/L(CLSI折点1 mg/L敏感)。43300对达托霉素保持完全敏感。在含达托霉素的培养基上传代可能诱导mprF和cls2基因突变导致达托霉素耐药(MIC升至>4 mg/L),这种耐药与万古霉素中介耐药(VISA)共享细胞包膜稳态通路。
订购信息
| 产品名称 | 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌标准株(MRSA) |
| 拉丁名 | Staphylococcus aureus subsp. aureus |
| 保藏中心编号 | ATCC 43300 |
| 参考信息 | mecA+/SCCmec II 型 / HA-MRSA |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息 |
| 存储条件 | 2~8°C 避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 CLSI M100 标准、ATCC 官方产品信息及相关文献,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Staphylococcus aureus 43300 产品页与 COA
- CLSI M100: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing,现行版本
- Ito T et al. (2001): SCCmec typing of MRSA — Antimicrob Agents Chemother 45:1323-1336
- EUCAST: 头孢西丁纸片法 MRSA 筛选指南