菌株来源与保藏信息
粪肠球菌标准株 ATCC 51299(Enterococcus faecalis)是 ATCC 保藏的氨基糖苷类高水平耐药(HLAR——High-Level Aminoglycoside Resistance)参考株,BSL-2。51299 的特征是携带双功能氨基糖苷修饰酶 AAC(6')-Ie-APH(2'')-Ia——赋予对庆大霉素(MIC > 500 mg/L)和链霉素(MIC > 2,000 mg/L)的高水平耐药——是 CLSI M100 和 EUCAST 推荐的肠球菌 HLAR 筛选试验的阳性质控菌株。51299 对万古霉素仍保持敏感(VSE——vancomycin-susceptible enterococcus)——vanA/vanB 阴性——因此与 ATCC 29212(HLAR 阴性 VSE)配对构成完整的肠球菌药敏质控组合。ATCC 51299 以冻干粉(0 代原装)形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,适用于 CLSI 肠球菌 HLAR 庆大霉素/链霉素筛选阳性质控及肠球菌耐药机制教学。
生物学特性
| 特征 | ATCC 51299(HLAR+ VSE) |
| 革兰染色 | 阳性球菌,成对或短链排列 |
| 触酶 | 阴性(与葡萄球菌的关键区分) |
| PYR | 阳性(粪肠球菌——区别于屎肠球菌的阴性或弱阳性) |
| 胆汁七叶苷 | 阳性(黑色——七叶苷水解) |
| 6.5% NaCl | 阳性(耐盐——肠球菌属特征) |
| 庆大霉素 MIC | > 500 mg/L(HLAR——CLSI 折点 ≤ 500 mg/L 敏感) |
| 链霉素 MIC | > 2,000 mg/L(HLAR——肉汤法筛选 > 1,000 mg/L 判定耐药) |
| 万古霉素 MIC | 1~4 mg/L(敏感——CLSI 折点 ≤ 4 mg/L 敏感) |
| 溶血性 | 通常 γ 溶血(不溶血)——偶见 α 溶血 |
ATCC 51299 的 HLAR 表型源于质粒或转座子携带的双功能酶 AAC(6')-Ie-APH(2'')-Ia(由 aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia 基因编码)——该酶同时具有 6'-N-乙酰转移酶和 2''-O-磷酸转移酶活性——可修饰几乎所有临床使用的氨基糖苷类抗生素(庆大霉素、妥布霉素、奈替米星、阿米卡星)。肠球菌对氨基糖苷类的天然低水平耐药(细胞壁通透性屏障)与 HLAR 的高水平修饰酶耐药是两种不同的耐药机制——前者仅导致 MIC 中度升高(8~64 mg/L)——后者使 MIC 高达 > 500 mg/L——彻底消除氨基糖苷类与细胞壁活性抗生素(如氨苄西林/万古霉素)的协同杀菌作用。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、血琼脂、BHI 琼脂 |
| 液体培养基 | TSB、BHI 肉汤、CAMHB(药敏试验) |
| 温度 | 35 ± 2°C |
| 培养时间 | 18~24 h |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3~0.5 mL TSB 或 BHI 肉汤,轻轻旋转重悬。
- 转移至 TSA 或血琼脂平板,35 ± 2°C 孵育 18~24 h。
- 复苏后在含 500 mg/L 庆大霉素的 BHI 琼脂上划线验证 HLAR 表型——生长确认 HLAR 阳性。
⚠ 质控关键:51299 的 aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia 基因通常位于可移动遗传元件(Tn5281 样转座子)上——在无抗生素压力的非选择性培养基上连续传代 10~15 代后,转座子可能发生精确切除(precise excision)导致 HLAR 表型丢失。推荐每 5 代在含 500 mg/L 庆大霉素的 BHI 平板上验证耐药表型——若出现不生长的菌落——从冻干粉重新复苏。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| TSA斜面(4C) | 封口膜密封 | 1-2月 |
| TSB+15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年+ |
| 冻干粉(4C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
质控应用
CLSI M100——肠球菌 HLAR 筛选阳性质控
CLSI M100 推荐对所有血流感染和心内膜炎患者分离的肠球菌进行 HLAR 筛选——因为 HLAR 阳性彻底否定氨基糖苷类与细胞壁活性抗生素(氨苄西林、万古霉素)的协同杀菌方案。ATCC 51299 是HLAR 筛选试验的阳性质控——配合 ATCC 29212(HLAR 阴性阴性质控):庆大霉素 120 μg 纸片——51299 无抑菌圈/≤ 6 mm(耐药) vs 29212 ≥ 10 mm(敏感);链霉素 300 μg 纸片——51299 无抑菌圈/≤ 6 mm(耐药) vs 29212 ≥ 10 mm(敏感)。
肠球菌耐药机制教学模型
51299 与 29212(VSE/HLAR⁻)和 15305(VSE/HLAR⁻—屎肠球菌)共同构成肠球菌耐药性教学的完整菌株组合:29212 代表"野生型"粪肠球菌(无获得性高水平耐药)、51299 代表"HLAR+"粪肠球菌(氨基糖苷修饰酶阳性——协同杀菌无效)、15305 代表"屎肠球菌"(不同物种的天然耐药谱差异——对氨苄西林天然耐药率更高)——三株配对演示肠球菌属耐药机制的三个维度。
常见问题
Q: 51299 做 HLAR 筛选时为什么用 120 μg 庆大霉素纸片而不是常规的 10 μg?
肠球菌对氨基糖苷类存在天然低水平耐药(细胞壁通透性降低——庆大霉素 MIC 8~64 mg/L)——常规 10 μg 庆大霉素纸片对所有肠球菌均显示耐药(抑菌圈 0 mm)——无法区分天然低水平耐药与获得性 HLAR。120 μg 高载量纸片可突破细胞壁通透屏障——仅在高水平修饰酶(HLAR)存在时仍显示耐药——是区分二者的唯一方法。
Q: 51299 的万古霉素敏感——为什么需要验证?
51299 为 VSE 表型(vanA⁻/vanB⁻)——万古霉素 MIC 1~4 mg/L。但需要注意的是——肠球菌的 aac(6')-Ie-aph(2'')-Ia 基因与 vanA 基因簇可共存于同一接合质粒(如 pMG1 样质粒)——在临床分离株中 HLAR+VRE(万古霉素耐药肠球菌)共表型并不罕见。51299 仅代表 HLAR+ VSE——不能替代 VRE 质控。
Q: 51299的HLAR对庆大霉素和链霉素都是高水平耐药吗?
51299庆大霉素120ug纸片无抑菌圈,链霉素300ug纸片同样无抑菌圈。aac-aph双功能酶可同时修饰庆大霉素类和链霉素。但临床分离株中约20-40%的HLAR粪肠球菌仅对庆大霉素耐药而对链霉素敏感,两种氨基糖苷类须分别测试。
订购信息
| 产品名称 | 粪肠球菌 HLAR 阳性标准株 |
| 拉丁名 | Enterococcus faecalis |
| 保藏中心编号 | ATCC 51299 |
| 参考信息 | HLAR+(庆大霉素/链霉素) / VSE / CLSI M100 阳性质控 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息 |
| 存储条件 | 2~8°C 避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 CLSI M100 标准、ATCC 官方产品信息及相关文献,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Enterococcus faecalis 51299 产品页与 COA
- CLSI M100: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing,现行版本
- Hollenbeck BL, Rice LB (2012): Intrinsic and acquired resistance mechanisms in enterococcus — Virulence 3:421-433
- EUCAST: 肠球菌 HLAR 筛选指南