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ATCC BAA-1025 大肠埃希菌 BL21(DE3) 标准菌株

简要描述：ATCC BAA-1025 大肠BL21(DE3) T7表达宿主，pET系统指定。杭州康氧ATCC 0代原装供应。...

更新时间：2026-08-07 21:26:47
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ATCC BAA-1025 大肠埃希菌 BL21(DE3) 标准菌株

ATCC BAA-1025 大肠BL21(DE3) T7表达宿主，pET系统指定。杭州康氧ATCC 0代原装供应。

货期

3-7 周

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ATCC标准菌株

详细介绍

菌株来源与保藏信息

大肠埃希菌 BL21(DE3) ATCC BAA-1025（Escherichia coli B strain — BL21(DE3)）是 ATCC 保藏的一株大肠埃希菌 B 系 T7 表达宿主菌，BSL-1。该菌株携带 λDE3 溶源噬菌体——其基因组中整合了受 lacUV5 启动子调控的 T7 RNA 聚合酶基因——在 IPTG 诱导下（通常 0.1-1 mM）表达 T7 RNA 聚合酶——转而驱动 T7 启动子（pET 载体系列）转录目标基因——实现外源蛋白的高效表达。ATCC BAA-1025 是商品化 BL21(DE3) 的 ATCC 官方保藏株——与 Novagen/Merck 的商品化 BL21(DE3) 感受态细胞来源于同一菌株背景。B 系大肠埃希菌（区别于 K-12 系）天然缺失 lon 和 ompT 蛋白酶——减少了异源蛋白的降解——是 T7 表达系统的首选宿主。

杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。

生物学特性

特征	ATCC BAA-1025 (BL21 DE3) 表现
亲本菌株	大肠埃希菌 B 系（非 K-12）——天然 lon⁻ ompT⁻ 蛋白酶缺陷
λDE3 溶源	阳性——染色体整合 T7 RNA 聚合酶基因（lacUV5-T7 gene 1）
乳糖利用	利用 IPTG 诱导——不被乳糖代谢消耗（IPTG 为不可水解的乳糖类似物）
对抗生素敏感	无抗生素抗性标记——可用于氨苄西林、卡那霉素等标准筛选标记的载体
T7 表达产率	总细胞蛋白的 30-50%（诱导后 3-5 h）——最高可达包涵体水平
氧化酶	阴性
菌落形态	LB 琼脂上乳白色光滑菌落——与 K-12 无形态差异

BL21(DE3) 是pET 表达系统（T7 启动子系列载体）的指定宿主菌。T7 RNA 聚合酶的转录速率是大肠埃希菌 RNA 聚合酶的 5-8 倍——目标基因 mRNA 的大量积累使翻译步骤成为蛋白产率的唯一限制——而非转录。DE3 溶源噬菌体的lacI 阻遏物控制 T7 RNAP 的基态表达——未诱导时基态泄漏极低（< 1% 的诱导水平）——适合毒性蛋白的受控表达。

培养条件与表达诱导

常规培养

参数	推荐条件
固体培养基	LB 琼脂（± 抗生素选择标记——氨苄西林 100 μg/mL 或卡那霉素 50 μg/mL）
液体培养基	LB 肉汤、TB 培养基（高密度表达——达 OD600 4-6）
温度	37°C（生长）；16-30°C（诱导表达——低温降低包涵体形成）
IPTG 浓度	0.1-1 mM——低浓度（0.1 mM）适合可溶性蛋白、高浓度（1 mM）适合包涵体纯化
诱导时间	3-5 h（37°C）；12-16 h（16-25°C 低温过夜）

保藏条件

保藏方式	条件	期限
LB 斜面（4°C）	封口膜密封	1-2 月
LB + 15% 甘油（-70°C）	冻存管液氮速冻	2 年以上
冻干粉（4°C）	原装密封	见 ATCC 检测报告

冻干粉复苏步骤

在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL LB 肉汤，轻轻旋转重悬。
划线至 LB 琼脂平板，37°C 孵育过夜（12-16 h）。
复苏后挑取单菌落接种 LB 肉汤——37°C 摇菌至 OD600 0.4-0.6——加入 IPTG 至 0.1 mM 做表达试验——SDS-PAGE 验证 T7 表达功能正常（30-37°C 3-5h 应见目标蛋白条带）。

⚠ DE3 溶源稳定性：BL21(DE3) 在无抗生素选择压力的连续传代中——λDE3 溶源噬菌体可能因同源重组而自发丢失（< 10⁻⁶/代——频率极低但不为零）。建议每季度验证 DE3 溶源未丢失——将单菌落在含 IPTG 0.1 mM + X-Gal 40 μg/mL 的 LB 平板上划线——若 T7 RNAP 正常——T7-lacZ 报告质粒的转化子应呈蓝色（X-Gal 水解）。

质控应用

T7 pET 表达宿主——蛋白生产行业标准

BAA-1025 是 pET 系列表达质粒（如 pET-28a、pET-32a）的指定宿主。典型表达流程：BL21(DE3) 转化 pET 质粒 → LB+抗生素平板筛选 → 单菌落 LB 过夜 → 1:50 稀释至新鲜 LB → 37°C 摇菌至 OD600 0.4-0.6 → IPTG 0.1-1 mM 诱导 → 3-5 h 收获。BAA-1025 的 lon⁻/ompT⁻ 双缺陷确保诱导期间的蛋白降解率最小化——适合直接 SDS-PAGE 分析或 Ni-NTA 亲和层析纯化。

实验室标准——感受态细胞制备

BAA-1025 冻干粉复苏后的第二代培养物是制备化学感受态（CaCl₂ 法）或电转化感受态细胞的理想菌源。转化效率基准：CaCl₂ 法 ≥ 10⁶ CFU/μg pUC19、电转化法 ≥ 10⁹ CFU/μg pUC19。每批次感受态制备后必须用空载体转化做效率验证——低于基准值 10 倍的批次废弃重制。

常见问题

Q: BL21(DE3) 和 BL21(DE3)pLysS 有什么区别？
pLysS 是一类携带 lysS 基因（表达 T7 溶菌酶——T7 RNAP 的天然抑制物）的氯霉素抗性质粒——进一步抑制 T7 RNAP 的基态泄漏。如果表达目标是毒性蛋白（如膜蛋白、核酸酶）——优先使用 BL21(DE3)pLysS（如 ATCC BAA-3042）。如果表达非毒性蛋白（如 GFP、GST 融合蛋白）——BAA-1025（无 pLysS）足以满足需求——且无氯霉素抗性干扰。

Q: 表达产率低——怎么排查？
排查顺序：(1) IPTG 是否新鲜配制——IPTG 水溶液在 4°C 下仅稳定 1-2 周——冻融后的 IPTG 活性下降；(2) OD600 的诱导点——最佳为 0.4-0.6（对数中期）——OD 过低细胞量不足、过高进入平台期代谢活性下降；(3) 是否使用了 TB 替代 LB——TB 培养基的磷酸盐缓冲系统支持 OD600 至 4-6——蛋白产量是 LB 的 3-5 倍。三项排查后仍低——怀疑质粒的 T7 启动子序列有突变——重新测序确证。

Q: IPTG 诱导后细胞裂解——是毒性太强吗？
可能。解决方案：(1) 降低 IPTG 至 0.01-0.05 mM——提供微弱的 T7 RNAP 激活——减少转录速率——降低蛋白折叠压力；(2) 降低诱导温度至 16-20°C——低温减慢翻译速率——增加新生肽链的正确折叠时间；(3) 如果以上两步无效——改用 pLysS 菌株（BAA-3042）或 C41(DE3)（毒性蛋白专用表达宿主）。

订购信息

产品名称	大肠埃希菌 BL21(DE3) 标准菌株
拉丁名	Escherichia coli B — BL21(DE3)
保藏中心编号	ATCC BAA-1025
参考信息	lon⁻ ompT⁻ / λDE3 溶源 / T7 表达宿主 / pET 系统指定
产品形式	冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告
存储条件	2-8°C 避光保存

如需批量订购或技术咨询，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。

参考资料

Studier FW & Moffatt BA (1986): Use of bacteriophage T7 RNA polymerase to direct selective high-level expression of cloned genes — Journal of Molecular Biology
ATCC 官网：Escherichia coli BAA-1025 产品页与检测报告（COA）
Novagen/Merck: pET System Manual — 11th Edition
Dubendorff JW & Studier FW (1991): Controlling basal expression in T7 expression system — Journal of Molecular Biology
Rosano GL & Ceccarelli EA (2014): Recombinant protein expression in Escherichia coli — Frontiers in Microbiology
Shin CS et al. (1997): Enhanced production of human mini-proinsulin in BL21(DE3) — Biotechnology and Bioengineering

技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及相关标准文件，仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。

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常规培养

保藏条件

冻干粉复苏步骤

T7 pET 表达宿主——蛋白生产行业标准

实验室标准——感受态细胞制备

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