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ATCC VR-1838 寨卡病毒 Zika virus 标准株（东非基因型）
ATCC VR-1838 寨卡病毒MR766株（BSL-2，东非基因型），WHO推荐PRNT参考病毒。杭州康氧ATCC原装供应。
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病毒株来源与保藏信息
寨卡病毒（Zika virus，ZIKV）标准株 ATCC VR-1838（MR 766 株）是 ATCC 保藏的寨卡病毒经典参考株，BSL-2。MR 766 于 1947 年 4 月从乌干达寨卡森林（Zika Forest）一只实验性森林哨兵恒河猴（rhesus monkey No. 766）的血液中分离——是全球第一株被发现的寨卡病毒，属于东非基因型（East African lineage）。MR 766 在乳鼠脑内传代超过 150 代后适应于 Vero 细胞——当前 ATCC 提供的 VR-1838 为 Vero 细胞适应株。MR 766 与 2015-2016 年美洲大流行株（亚洲基因型——如 PRVABC59、FLR）在 E 蛋白氨基酸序列上有约 5% 的差异——但其在 Vero 细胞上的复制滴度（10⁶~10⁷ PFU/mL）高于大多数亚洲基因型临床分离株，因而被广泛用于抗病毒药物筛选和中和试验。ATCC VR-1838 以冷冻感染细胞培养液形式提供，经 PFU 或 TCID₅₀ 滴度验证，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。
杭州康氧以 ATCC 原装冷冻保存液形式提供，适用于寨卡病毒抗病毒药物筛选、中和抗体效价测定（PRNT₅₀）及消毒剂杀病毒效力评价。
病毒学特征
| 特征 | ATCC VR-1838（ZIKV MR 766） |
|---|---|
| 病毒科 | 黄病毒科（Flaviviridae），黄病毒属（Flavivirus） |
| 核酸类型 | 单股正链 RNA（+ssRNA），约 10.8 kb（GenBank: AY632535） |
| 包膜 | 有包膜——脂质双层 + E 蛋白/M 蛋白突起 |
| E 蛋白 | 介导受体结合和膜融合——含有黄病毒交叉反应性表位（融合环-FL）和 ZIKV 特异性中和表位（DIII） |
| NS1 蛋白 | 分泌型——ZIKV 感染早期血清标志物（抗原检测靶标）——与登革 NS1 有交叉反应 |
| 基因型 | 东非基因型（East African lineage）——与亚洲基因型 E 蛋白差异约 5% |
| CPE | Vero 细胞：感染 3~5 d 后细胞变圆、折光增强、脱落——部分 ZIKV 株在 Vero 上 CPE 不明显需用免疫荧光确证 |
| 受体 | TIM-1、TAM（Axl/Tyro3）、DC-SIGN——非特异性附着受体 |
| 最适温度 | 37°C；病毒吸附步骤可在 37°C 或 4°C 进行（4°C 减少内吞速率差异） |
| 对消毒剂敏感性 | 有包膜病毒——对 70% 乙醇、0.5% 次氯酸钠高度敏感 |
MR 766 在乳鼠脑内传代的漫长历史（> 150 代）使其获得了显著的神经毒力衰减——与亚洲基因型临床分离株相比——MR 766 在 IFNAR⁻/⁻ 小鼠模型中的致病性明显减弱（死亡率从 80~100% 降至 20~40%）。但 E 蛋白 DIII 结构域在东亚和亚洲基因型之间高度保守（同源性 > 98%）——因此 MR 766 诱发的中和抗体对亚洲基因型 ZIKV 仍具有交叉中和活性——这种交叉反应使 MR 766 成为寨卡疫苗血清学评价中最常用的参考株之一。需特别注意：ZIKV E 蛋白融合环（FL）表位与登革病毒（DENV 1~4）高度同源——登革预存免疫者血清对 MR 766 可能呈现低滴度假阳性交叉中和（PRNT₅₀ < 1:40）——解释中和试验结果时需排除登革背景。
培养条件与宿主系统
推荐宿主细胞
| 参数 | 推荐条件 |
|---|---|
| 宿主细胞 | Vero（ATCC CCL-81）——首选；Vero E6（ATCC CRL-1586）、C6/36（白纹伊蚊细胞，ATCC CRL-1660）——备选 |
| 培养基 | DMEM 或 MEM + 2% FBS（维持液）；5~10% FBS（生长液） |
| 接种 MOI | 0.01~0.1 PFU/细胞（低 MOI 有利于多轮复制完整病毒颗粒占比更高） |
| 温度 | 37°C（哺乳动物细胞）；28°C（C6/36 蚊细胞——更接近蚊虫媒介体内温度） |
| CO₂ | 5% CO₂ |
| CPE 时间 | MOI=0.1 时 Vero 细胞 3~5 d；C6/36 细胞 4~7 d（CPE 较微弱——需用免疫荧光确证感染） |
病毒收获与保存
- CPE 达到 70~80% 时收集培养上清（ZIKV 以出芽方式释放——> 90% 感染性病毒存在于上清中——无需反复冻融细胞）。
- 4°C 3,000 × g 离心 10 min 去除细胞碎片。
- 添加 HEPES（终浓度 20 mM，pH 7.4）稳定 pH——ZIKV 在 pH < 6.5 时 E 蛋白构象不可逆变化导致失活。
- 分装后 -80°C 保存，避免反复冻融超过 2 次（每次冻融丧失约 0.5 log₁₀ 滴度）。
⚠ ZIKV 培养的特殊注意事项：①MR 766 在 Vero 细胞上的 CPE可能不显著（尤其是低 MOI 时）——与亚洲基因型临床株相比——MR 766 的 CPE 发展较温和——推荐用免疫荧光法（抗 ZIKV E 蛋白或 NS1 抗体）确证感染——而非仅依赖 CPE 判读；②C6/36 蚊细胞培养 ZIKV 时不需要 CO₂ 培养箱——28°C 普通培养箱即可——但病毒滴度通常比 Vero 细胞低 1~2 log₁₀；③ZIKV 与 DENV 的血清学交叉反应是实验室生物安全的重要考量——操作 ZIKV 的实验人员若曾感染登革热——其血清中的登革抗体可能通过抗体依赖性增强效应（ADE）在意外暴露时加重 ZIKV 感染——必须在 BSL-2 中严格操作。
质控应用
中和抗体检测——PRNT₅₀ 金标准
蚀斑减少中和试验（PRNT）是评价 ZIKV 中和抗体效价的金标准。VR-1838（MR 766）是 WHO 和 FDA 推荐的 ZIKV PRNT 参考病毒之一。经典 PRNT₅₀ 流程：系列稀释的待测血清与 50~100 PFU 的 MR 766 在 37°C 预孵育 1 h 后接种 Vero 单层，覆盖 1% 甲基纤维素或琼脂糖覆盖层——37°C 5% CO₂ 培养 4~5 d——结晶紫染色计数蚀斑。PRNT₅₀ 滴度定义为与无血清病毒对照相比蚀斑数减少 ≥ 50% 的最低血清稀释度倒数的对数值。MR 766 在 Vero 上的蚀斑形态清晰（直径 1~2 mm——边缘规则）——适合自动蚀斑计数系统。
黄病毒交叉反应性评价
MR 766 因其 E 蛋白 DIII 与登革病毒的显著差异——在黄病毒交叉反应性评估中作为ZIKV 特异性对照——与 DENV-1（VR-1856）、DENV-2（VR-1584）、WNV（VR-1507）和 YFV（VR-1506）组成黄病毒中和抗体鉴别组合——帮助区分 ZIKV 感染与登革或黄热疫苗接种后的交叉反应性抗体。
常见问题
Q: VR-1838（东非型）和 VR-1843（亚洲型/PRVABC59）在PRNT中能互换吗？
有限可互换。WHO 推荐在 ZIKV 血清流行病学调查中同时使用东非型（MR 766）和亚洲型（PRVABC59 或 FLR）进行 PRNT——因两者之间的中和抗体滴度可能相差 2~4 倍（亚洲型中和滴度通常更高——亚洲型 E 蛋白与当前流行的 ZIKV 更接近）。若仅用一种病毒做 PRNT——优先选用与当地流行基因型匹配的病毒株。MR 766 适用于非洲地区的血清学调查和与非洲基因型相关的疫苗评价。
Q: Vero细胞上不出现CPE是不是我的VR-1838失活了？
不一定。MR 766 在 Vero 上的 CPE 确实不如其他黄病毒（如登革病毒）显著——尤其在低 MOI（< 0.01）接种时——感染早期的 CPE 可能非常微弱（仅少数细胞变圆）。强烈推荐在 CPE 不确定时用免疫荧光法（IFA——使用抗 ZIKV E 蛋白抗体如 4G2 或 ZV-2，VR-1864）确证感染——不要仅凭 CPE 判定病毒失活。若确证无感染信号——从 ATCC 原始管重新复苏。
Q: ZIKV 和 DENV 在PRNT中如何排除交叉反应？
标准做法是同步测试ZIKV（VR-1838 或 VR-1843）和 DENV 1~4（VR-1856/VR-1584/VR-1810/VR-1490）——若血清对 ZIKV 的 PRNT₅₀ 滴度 ≥ 4 倍于对任何 DENV 血清型的滴度——可判定为 ZIKV 特异性中和抗体阳性。若对 ZIKV 和 ≥ 1 种 DENV 的 PRNT₅₀ 均在 1:20~1:80 低滴度范围且无明显血清型优势——很可能为登革预存免疫交叉反应（假阳性 ZIKV）而非真正的 ZIKV 既往感染。
订购信息
| 产品名称 | 寨卡病毒标准株（东非基因型） |
|---|---|
| 病毒拉丁名 | Zika virus |
| 保藏中心编号 | ATCC VR-1838 |
| 参考信息 | MR 766 株（东非基因型）；GenBank: AY632535 |
| 产品形式 | 冷冻感染细胞培养液（含 HEPES 保护剂），≥ 10⁴ PFU/mL |
| 存储条件 | -70°C 或液氮气相保存；避免反复冻融 |
如需批量订购或技术咨询，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及相关文献，仅供实验室专业人员参考。VR 系列病毒产品的培养和使用需在BSL-2 级生物安全实验室中进行——操作者应接受生物安全培训并遵守《病原微生物实验室生物安全管理条例》。特别提示：寨卡病毒与登革病毒之间存在血清学交叉反应——有登革感染史的实验人员操作 ZIKV 时应加强个人防护。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网：Zika virus VR-1838 产品页与检测报告
- Dick GWA et al. (1952): Zika virus (I) — Isolations and serological specificity — 原始发现文献
- WHO: Zika virus laboratory testing guidelines
- Haddow AD et al. (2012): Genetic characterization of Zika virus strains — PLoS NTD 6:e1477
- Stettler K et al. (2016): Specificity, cross-reactivity, and function of antibodies elicited by Zika virus infection — Science 353:823-826
- EN 14476: Quantitative suspension test for virucidal activity
- ATCC 25923 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
- ATCC 25922 大肠埃希菌 Escherichia coli 标准菌株
- ATCC 16404 巴西曲霉（黑曲霉）Aspergillus brasiliensis 标准菌株
- ATCC 10231 白色念珠菌 Candida albicans 标准菌株
- ATCC 27853 铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa 标准菌株
- ATCC 4617 支气管鲍特杆菌 Bordetella bronchiseptica 标准菌株
- ATCC 6538 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
- ATCC 29213 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus 标准菌株
- ATCC 15531 肺炎支原体 Mycoplasma pneumoniae 标准菌株
- ATCC 19115 单核细胞增生李斯特菌 Listeria monocytogenes 标准菌株
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