菌株来源与保藏信息
ATCC 10536(Klebsiella pneumoniae (Schroeter) Trevisan)是一株经典的肺炎克雷伯菌参考菌株,BSL-2。作为肠杆菌科克雷伯菌属的模式种代表,10536 不携带 ESBL、KPC 或 NDM 等获得性耐药基因——是其被广泛用于消毒剂评价、培养基质控和防腐挑战试验的重要基础。与 ATCC 700603(产 SHV-18 ESBL)和 BAA-2146(产 KPC-2)不同,10536 代表了肺炎克雷伯菌的"基线"——全敏感谱——用于区分"固有耐药性"和"获得性耐药性"的参考标准。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 10536 表现 |
| 革兰染色 | 阴性杆菌 |
| 氧化酶 | 阴性 |
| MacConkey 生长 | 阳性——粉红色粘稠菌落(乳糖发酵) |
| VP 试验 | 阳性 |
| 鸟氨酸脱羧酶 | 阴性(区别于肠杆菌属——鸟氨酸阳性) |
| 运动性 | 阴性 |
| 荚膜 | 丰富——拉丝试验阳性 |
| 菌落形态 | 圆形凸起、乳白色、粘液型——TSA 上 24h 直径 2–4mm |
| ESBL | 阴性——头孢他啶敏感(区别于 700603) |
| 碳青霉烯酶 | 阴性——亚胺培南敏感(区别于 BAA-2146) |
ATCC 10536 作为"野生型"肺炎克雷伯菌的代表——其抗生素敏感谱覆盖了从氨苄西林(天然耐药——染色体编码 SHV-1 β-内酰胺酶低水平表达)到碳青霉烯类(敏感)的完整梯度。克雷伯菌属对氨苄西林的固有耐药是所有肠杆菌科中程度最弱的——表现为 MIC 在 8–32 μg/mL 范围内的"低水平耐药"而非完全的"高度耐药"——这一点与铜绿假单胞菌对氨苄西林的"天然完全耐药"(MIC >256 μg/mL)截然不同。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA、MacConkey(粉红色粘稠菌落)、MHA |
| 液体培养基 | TSB、CAMHB |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 18–24 h |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封冷藏 | 1–2 个月 |
| TSB+15% 甘油(-70°C) | 冻存管液氮速冻 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封西林瓶 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在 BSL-2 生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3–0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 转移至 TSA 平板,35±2°C 孵育 18–24 h。
- 复苏后挑取单菌落在 MacConkey 上确认粉红色粘稠菌落。
- TSB+15% 甘油 -70°C 冻存。
消毒剂评价——肠杆菌科代表菌株
消毒剂定量悬浮试验(EN 1040/EN 1276)
ATCC 10536 作为肠杆菌科的代表菌株被纳入 EN 1040(化学消毒剂基本杀菌活性)和 EN 1276(化学消毒剂食品工业定量悬浮试验)的强制测试菌株清单。其丰富的荚膜多糖层对季铵盐类消毒剂和氯己定具有一定屏障作用——在 0.05% 苯扎氯铵的 1 分钟接触试验中,10536 的 log 减少值通常比大肠埃希菌 25922 低 1–2 个 log。含季铵盐的消毒剂若仅用 25922 做肠道菌代表可能高估实际消毒效力——补做 10536 可提供荚膜菌的挑战数据。
培养基促生长验证
在 MacConkey 琼脂和 VRBA(结晶紫中性红胆盐琼脂)的每批促生长能力验证中,10536 作为乳糖发酵菌株验证鉴别培养基中乳糖发酵指示系统的有效性——10536 应在 24h 内产生粉红色菌落(MacConkey)或带沉淀环的紫红色菌落(VRBA)。
质控应用
消毒剂评价 EN 1040/EN 1276 肠杆菌代表菌
ATCC 10536 是 EN 1040 和 EN 1276 中指定的肠杆菌科代表测试菌株。在 EN 1276 定量悬浮试验中,10536 需与 6538(金葡菌)和 9027(铜绿假单胞菌)共同测试——10536 代表革兰阴性肠杆菌、9027 代表非发酵菌、6538 代表革兰阳性球菌。仅用 9027 验证的消毒剂可能对肠杆菌科效力不足——肠杆菌科外膜脂多糖结构对季铵盐和双胍类消毒剂的通透性低于铜绿假单胞菌。10536 作为野生型不产 ESBL 的肺炎克雷伯菌——敏感谱代表无耐药机制的肠杆菌科基线。
培养基促生长验证
ATCC 10536 在 MacConkey 琼脂上粉红色粘稠菌落应在 24 h 内达到直径 1.5-2.5 mm。若 24 h 菌落小于 1 mm——排查胆盐浓度是否偏高。胆盐对肺炎克雷伯菌的抑制作用强于大肠埃希菌——同一批 MacConkey 用 25922 验证可能合格但用 10536 验证生长受抑。每批次 MacConkey 配制后应以 10536 + 25922 双菌验证促生长能力。
常见问题 ============ -->
常见问题
Q: 10536 和 700603 在 MacConkey 上的菌落形态完全一样——怎么区分?
仅通过菌落形态无法区分——两者均为乳糖发酵粉红色粘稠菌落。最快区分方法:用头孢他啶(30μg)纸片做快速药敏试验——10536 抑菌圈 ≥18mm(敏感),700603 抑菌圈 ≤15mm(ESBL 表型)。如需分子确认——PCR 检测 blaSHV 基因——10536 仅携带染色体 SHV-1(野生型),700603 携带 SHV-18(ESBL 突变型)。
Q: 10536 可以替代 25922 做肠杆菌科药敏 QC 吗?
不可以。CLSI M100 指定 25922 为肠杆菌科药敏阳性对照(全敏感 QC 菌株)——25922 对氨苄西林也保持敏感(MIC ≤8 μg/mL),而 10536 对氨苄西林为固有低水平耐药(MIC 16–32 μg/mL)。若用 10536 替代 25922 做氨苄西林药敏 QC,将导致假耐药误判。
订购信息
| 产品名称 | 肺炎克雷伯菌标准菌株 |
| 拉丁名 | Klebsiella pneumoniae |
| 保藏中心编号 | ATCC 10536 |
| 参考信息 | 野生型/无ESBL/KPC |
| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附ATCC检测报告 |
| 存储条件 | 2-8度C避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及相关标准文件,仅供实验室专业人员参考。肺炎克雷伯菌为 BSL-2 级条件致病菌。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Klebsiella pneumoniae 10536 产品页与检测报告(COA)
- EN 1040:化学消毒剂和防腐剂——基本杀菌活性定量悬浮试验
- EN 1276:化学消毒剂——食品工业用杀菌活性定量悬浮试验
- CLSI M100:Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing
- 中国药典(ChP)2020 年版:通则 1105、1106 微生物限度检查
- EUCAST:肠杆菌科药敏试验方法与折点