Q: 13032和19115(4b)在使用上有什么区别?13032为1/2a血清型——环境(土壤、水体、青贮)分离率最高,更适合作为食品加工环境监控的阳性对照。19115为4b血清型——与人类暴发事件的关联更密切,更适合临床标本检验的阳性对照。GB 4789.30推荐两者同时使用作为完整阳性对照——若只选一株,食品企业倾向于13032,医院微生物室倾向于19115。- ============ 菌株来源 ============ -->
菌株来源与保藏信息
ATCC 13032(Listeria monocytogenes)是一株单核细胞增生李斯特菌的血清型 1/2a 参考菌株,BSL-2。该菌株分离自临床感染的脑脊液标本,是李斯特菌属中最早完成全基因组测序的代表株之一(GenBank: NC_003210)。单核细胞增生李斯特菌是四大食源性致病菌之一——其最危险的特性是在 4°C 冷藏温度下仍能缓慢增殖(嗜冷性)——这一特性使其在冷藏即食食品(RTE)中构成特殊的食品安全风险。感染后可引起李斯特菌病——对孕妇(可致流产)、新生儿、老年人和免疫功能低下者致死率高达 20–30%。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 13032 表现 |
| 革兰染色 | 阳性短小杆菌(可被误读为球菌或类白喉棒杆菌) |
| 触酶 | 阳性 |
| 氧化酶 | 阴性 |
| 动力 | 25°C 阳性("翻滚"样运动——伞状穿刺生长);35°C 阴性或弱 |
| 溶血 | 窄 β 溶血——血琼脂上菌落下方可见窄溶血环 |
| CAMP 试验 | 与金葡菌(6538)协同——箭头状强化溶血;与马红球菌(6939)协同——块状 |
| 七叶苷水解 | 阳性(区别于链球菌属) |
| 4°C 生长 | 阳性——7–10 天后出现可见菌落(嗜冷性——食品安全关键) |
| 血清型 | 1/2a(4 个主要致病血清型之一——与暴发流行高度相关) |
| 菌落形态 | TSA 上 24h 针尖大小→48h 0.5–1mm 乳白光滑——透射光下蓝绿色辉光 |
ATCC 13032 为血清型 1/2a——与 4b、1/2b 和 1/2c 共同构成人类李斯特菌病的主要致病血清型。1/2a 在环境(土壤、水体、青贮饲料)中的分离率高于 4b(后者与暴发事件的关联更密切)。13032 在 4°C 的嗜冷性增长是其食品安全检测中的核心意义——传统食品微生物检验(35°C 孵育)无法体现冷藏即食食品的真实风险。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA + 5% 羊血、牛津琼脂(李斯特菌选择性)、PALCAM 琼脂 |
| 液体培养基 | TSB、Fraser 肉汤(增菌)、BLEB(缓冲李斯特菌增菌肉汤) |
| 温度 | 35±2°C(常规);4°C(嗜冷性检测) |
| 培养时间 | 24–48h(35°C);7–10 天(4°C) |
⚠ 选择性培养基注意:ATCC 13032 在牛津琼脂和 PALCAM 上的菌落形态与临床分离株一致——黑色菌落(七叶苷水解产物与铁离子螯合)带黑色晕轮。但部分批次的牛津琼脂中氯化锂浓度偏高(>7.5g/L)对 13032 有轻微抑制——若回收率低于预期,建议同时接种非选择性 TSA 血琼脂作为对照。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封,冷藏 | 2–3 个月(李斯特菌较持久) |
| TSB+15% 甘油(-70°C) | 冻存管,液氮速冻 | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封西林瓶 | 见 ATCC 检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在 BSL-2 生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3–0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 转移至 TSA 血琼脂平板,35±2°C 孵育 24–48h。
- 复苏后挑取单菌落做触酶(阳性)和 CAMP 试验确认。
- TSB+15% 甘油 -70°C 冻存。
食品微生物检验——李斯特菌阳性对照
GB 4789.30 / ISO 11290 阳性对照
ATCC 13032 作为单核细胞增生李斯特菌的参考菌株,被 GB 4789.30 和 ISO 11290 指定为食品中单核细胞增生李斯特菌检验的阳性对照菌株。在 Fraser 肉汤增菌→牛津/PALCAM 选择性琼脂分离→生化鉴定(API Listeria 或 VITEK 2 GP)→CAMP 试验确证的完整检验流程中,13032 作为阳性对照确保每一步培养基和方法的选择性及灵敏度在规定范围内。
与 ATCC 19115(4b 血清型)的协同使用
13032(1/2a 血清型)和 19115(4b 血清型)覆盖了人类李斯特菌病最主要的两个血清型——食品检验质量控制方案中两者应同时作为阳性对照——任何一种血清型在选择性培养基上的回收率不达标,均提示该方法不能涵盖李斯特菌的血清型多样性。
常见问题
Q: 13032 在 4°C 冷藏增菌 7 天仍未生长怎么办?
李斯特菌在 4°C 的倍增时间约为 12–24h——远慢于 35°C 的 40–60 分钟。13032 在冷藏温度下的生长还需要适应期——复苏后的第一代菌株在 4°C 可能 >10 天才出现可见菌落。建议先在 35°C 复苏一至两代,然后用对数期菌液接种冷藏平板——此时菌株已从冻干应激中恢复,4°C 的倍增时间可缩短至 8–12h。
Q: 13032 的 CAMP 试验阴性——是不是菌株有问题?
CAMP 试验的成败高度依赖于金葡菌(如 6538)β-溶血素的产量。若所用的金葡菌传代过多(>5 代),β-溶血素表达可能下调——导致协同溶血现象减弱或消失——而非 13032 的问题。使用新鲜复苏 ≤2 代的金葡菌进行 CAMP 试验,并同时在平板另一侧用马红球菌(ATCC 6939)做反向 CAMP 对照。
订购信息
| 产品名称 | 单核细胞增生李斯特菌标准菌株 |
| 拉丁名 | Listeria monocytogenes |
| 保藏中心编号 | ATCC 13032 |
| 参考信息 | 血清型1/2a, NC_003210 |
| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附ATCC检测报告 |
| 存储条件 | 2-8度C避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息及食品微生物学检验标准,仅供实验室专业人员参考。单核细胞增生李斯特菌为 BSL-2 级病原微生物。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Listeria monocytogenes 13032 产品页与检测报告(COA)
- GB 4789.30-2016《食品安全国家标准 单核细胞增生李斯特氏菌检验》
- ISO 11290-1:2017 Horizontal method for the detection of L. monocytogenes
- USDA FSIS MLG 8.13 Isolation and Identification of Listeria monocytogenes
- Glaser P et al. (2001): Comparative genomics of Listeria species(13032 全基因组序列)
- FDA BAM Chapter 10: Detection of Listeria monocytogenes