菌株来源与保藏信息
荧光假单胞菌标准株 ATCC 13525(Pseudomonas fluorescens)是 ATCC 保藏的经典非发酵革兰阴性杆菌参考株,BSL-1。13525 的特征是在缺铁条件下产生黄绿色荧光色素(pyoverdine——绿脓菌荧光素类铁载体)——在紫外灯(365 nm)下发出特征性荧光——是假单胞菌属中嗜冷性食品腐败菌的代表菌株。13525 在 4°C 仍能生长(嗜冷)——使其成为冷藏食品(乳制品、肉制品、鲜切蔬菜)微生物学检验和水处理系统微生物监测的标准菌株。ATCC 13525 以冻干粉(0 代原装)形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,适用于水处理系统微生物监测、冷藏食品腐败菌检验及消毒剂对嗜冷革兰阴性菌的效力验证。
生物学特性
| 特征 | ATCC 13525 |
| 革兰染色 | 阴性直或微弯杆菌 |
| 氧化酶 | 阳性 |
| 触酶 | 阳性 |
| 荧光色素 | pyoverdine——黄绿色——缺铁条件下产生——紫外灯 365 nm 荧光(+) |
| 绿脓菌素 | 阴性(与铜绿假单胞菌的关键区别) |
| 42°C 生长 | 阴性(与铜绿假单胞菌的关键区别) |
| 4°C 生长 | 阳性(嗜冷——冷藏食品腐败的代表菌) |
| 动力 | 极生多鞭毛——运动 |
| 精氨酸双水解酶 | 阳性 |
荧光假单胞菌是冷藏蛋白类食品(鲜肉、鲜奶、鱼)腐败的主要微生物之一——在 4°C 冷藏条件下仍可分泌耐热蛋白酶和脂肪酶——导致牛奶变苦(蛋白酶水解酪蛋白)、鲜肉表面粘滑(胞外多糖)。13525 的 pyoverdine 荧光是假单胞菌属中铁饥饿响应的经典模型——当培养基中铁浓度 < 1 μM 时——Fur 阻遏蛋白从 pvd 基因启动子解离——启动 pyoverdine 合成——紫外灯下出现荧光——这一表型用于验证培养基中铁含量和荧光假单胞菌的初步鉴定。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA、营养琼脂、King B 琼脂(荧光色素增强——低铁培养基促进 pyoverdine 产生) |
| 液体培养基 | TSB |
| 温度 | 25~30°C(最适);4°C(嗜冷验证) |
| 培养时间 | 25°C 18~24 h;4°C 5~7 d |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
| TSA斜面(4C) | 封口膜密封 | 1-2月 |
| TSB+15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年+ |
⚠ 培养关键:荧光假单胞菌在 TSA 25°C 培养时菌落呈淡黄色至黄绿色——紫外灯下荧光明显。若需增强荧光用于拍摄或演示——使用 King B 琼脂(蛋白胨 20 g + K2HPO4 1.5 g + MgSO4 1.5 g + 甘油 10 mL/L——不含铁)——这是促进 pyoverdine 产生的经典低铁培养基。
冻干粉复苏步骤
- 在超净工作台中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入0.3-0.5mL适宜的液体培养基,轻轻旋转重悬。
- 转移至推荐固体培养基平板或斜面,按推荐温度孵育18-24h。
- 复苏后挑取单菌落验证纯度,确认表型合格后投入日常使用。
质控应用
水处理系统微生物监测
荧光假单胞菌是饮用水和制药用水系统中最常见的假单胞菌属污染物——在管道生物膜中与铜绿假单胞菌共存。13525 被用于验证水系统消毒方案(如臭氧、过氧化氢)对非发酵革兰阴性菌的杀灭效果——嗜冷特性使其成为评估冷水管道消毒效果的理想指示菌。
化妆品/日化产品防腐挑战——嗜冷菌代表
化妆品在浴室潮湿低温环境(15~25°C)中可能被荧光假单胞菌污染。13525 作为嗜冷革兰阴性菌的代表被补充纳入化妆品防腐挑战试验——验证防腐体系在消费者使用温度(而非标准 35°C)下的有效性。
常见问题
Q: 怎么区分 13525 和铜绿假单胞菌(9027)?
13525:42°C不生长、4°C 生长、不产绿脓菌素、产黄绿色荧光。9027:42°C生长、4°C 不生长、产绿脓菌素(蓝绿色可溶色素——区别于 pyoverdine 的黄绿色荧光)。紫外灯下:13525 荧光明亮(pyoverdine 产量高)——9027 荧光较弱(pyoverdine 被绿脓菌素蓝绿色掩盖)。
Q: King B 琼脂上的荧光不出现怎么办?
确认 King B 琼脂中未添加铁离子(FeCl3 或 FeSO4——常见于某些加强配方的假单胞菌选择性琼脂中)——铁浓度 > 5 μM 即可通过 Fur 阻遏蛋白完全抑制 pyoverdine 合成。若需重新验证——使用蒸馏水替代自来水配制 King B 琼脂(自来水中铁含量通常 1~5 μM——足够抑制荧光)。
订购信息
| 产品名称 | 荧光假单胞菌标准株 |
| 拉丁名 | Pseudomonas fluorescens |
| 保藏中心编号 | ATCC 13525 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息 |
| 存储条件 | 2~8°C 避光保存 |
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息及相关标准文献,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Pseudomonas fluorescens 13525 产品页
- King EO et al. (1954): Two simple media for the demonstration of pyocyanin and fluorescein — J Lab Clin Med
- Meyer JM et al. (2002): Siderotyping of fluorescent Pseudomonas — Appl Environ Microbiol
- Meyer JM et al. (2002): Siderotyping of fluorescent Pseudomonas
- EN 1276: Disinfectant efficacy