菌株来源与保藏信息
大肠埃希菌 K-12 标准株 ATCC 23631(Escherichia coli K-12)是 ATCC 保藏的经典分子克隆宿主菌株,BSL-1。23631 是 K-12 株系的衍生株——含 recA1(同源重组缺陷——插入片段稳定不重排)和 endA1(非特异性核酸内切酶缺失——质粒 DNA 纯度极高)突变——使其成为分子生物学实验中最常用的质粒扩增宿主菌之一。23631 的功能特征与 DH5α(ATCC 47076)高度相似——在蓝白斑筛选(lacZΔM15 + X-Gal/IPTG)和化学转化实验中可互换使用。ATCC 23631 以冻干粉形式提供。
杭州康氧以 ATCC 原装冻干粉形式提供,适用于分子克隆质粒扩增、蓝白斑筛选及感受态细胞制备。
基因型与生物学特性
| 基因型 | 表型与用途 |
| recA1 | RecA 重组酶缺陷——克隆片段高度稳定——不产生同源重组导致的插入缺失 |
| endA1 | 核酸内切酶 I 缺失——质粒提取纯度极高——适合测序和转染级质粒制备 |
| lacZΔM15 | β-半乳糖苷酶 α 片段缺失——蓝白斑筛选:重组子白色——空载体蓝色 |
| hsdR17 | I 型限制-修饰系统缺陷——外源 DNA 不被降解——转化效率高 |
| thi-1 | 硫胺素营养缺陷——M9 基本培养基需补加硫胺素(1 μg/mL) |
| gyrA96 | DNA 旋转酶突变——萘啶酸耐药(不作为常规筛选标记——但可用于排除其他大肠杆菌污染) |
23631 作为 K-12 株系的衍生株不具备致病性——属于 BSL-1 安全级别。其 recA1 突变是质粒扩增实验中避免克隆片段重排的核心保障——野生型 RecA 可能通过同源重组导致多克隆位点区的片段缺失或倒位——recA1 可完全消除这一风险。endA1 突变使质粒提取物中非特异性核酸酶活性极低——适合测序和转染级质粒——核酸内切酶污染会导致测序信号衰减和转染效率降低。
培养条件与保藏
| 参数 | 条件 |
|---|
| 固体培养基 | LB 琼脂(+ 相应抗生素——氨苄西林 100 μg/mL 或其他选择标记) |
| 液体培养基 | LB 肉汤、SOB/SOC(转化后复苏) |
| 温度 | 37°C(生长——16~18 h) |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| LB斜面(4C) | 封口膜密封 | 1-2月 |
| LB+15%甘油(-70C) | 冻存管 | 2年+ |
质控应用
分子克隆中质粒扩增和蓝白斑筛选的标准宿主菌。23631(recA1 endA1)制备的化学感受态细胞转化效率约 10^6~10^7 CFU/μg pUC19——介于 DH5α(47076——10^7~10^8)和 BL21(BAA-392——10^6~10^7)之间。蓝白斑筛选体系中——将转化后菌液涂布于含 X-Gal(40 μg/mL)和 IPTG(0.1 mM)的 LB 氨苄西林平板——37°C 16~18 h——白色菌落为重组质粒——蓝色为空载体——蓝白比 > 95% 表明连接效率高。
常见问题
Q: 23631 和 47076(DH5α)有什么区别?
两者基因型高度相似(recA1 endA1 lacZΔM15)——蓝白斑筛选和质粒扩增性能可互换。47076 的转化效率略高(化学法 10^7~10^8 vs 10^6~10^7)——若需最高转化效率——选 47076;若仅需常规质粒扩增——两者任选即可。
订购信息
| 产品名称 | 大肠埃希菌 K-12 分子克隆宿主株 |
|---|
| 保藏中心编号 | ATCC 23631 |
| 产品形式 | 冻干粉,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息 |
|---|
免责声明:杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网 23631
- Sambrook J, Russell DW (2001): Molecular Cloning — 3rd ed.
- Green MR, Sambrook J (2012): Molecular Cloning — 4th ed.