菌株来源与保藏信息
脆弱拟杆菌 ATCC 25285(Bacteroides fragilis (Veillon and Zuber) Castellani and Chalmers)是 ATCC 保藏的一株厌氧革兰阴性杆菌标准菌株,BSL-2。该菌株是人类肠道菌群中丰度最高的革兰阴性厌氧菌之一——占成人粪便中可培养厌氧菌的 10-20%——同时也是厌氧菌感染临床分离率最高的病原菌(占厌氧菌菌血症的 40-50%)。ATCC 25285 在 CLSI M11 厌氧菌药敏试验中被列为参考菌株——用于脆弱拟杆菌群(B. fragilis group)的 β-内酰胺类和甲硝唑药敏质控。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 25285 表现 |
| 革兰染色 | 阴性多形性杆菌——可呈球杆状、丝状或肿胀形 |
| 厌氧性 | 专性厌氧——氧气浓度<0.5%时生长最佳 |
| 卡那霉素(1000µg)耐受 | 耐受——在含卡那霉素的 BBE 琼脂上正常生长——区别于其他革兰阴性厌氧菌 |
| 万古霉素(5µg)耐受 | 耐受——与卡那霉素共同构成脆弱拟杆菌群的鉴别特征 |
| 胆汁耐受 | 耐受 20%胆汁——Bacteroides Bile Esculin (BBE)琼脂——水解七叶苷呈黑色 |
| 靛基质 | 阴性——区别于多形拟杆菌(靛基质阳性) |
| 触酶 | 阳性——区别于其他拟杆菌属 |
| 菌落形态 | 血琼脂上灰白色圆形光滑菌落——厌氧 48h 直径 1-2mm |
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 非选择性 | 厌氧血琼脂(Brucella血琼脂+维生素K1+血红素) |
| 选择性 | BBE琼脂——黑色菌落(七叶苷水解) |
| 液体 | BHI肉汤(预还原)、CMG 肉汤 |
| 温度 | 35-37°C 厌氧培养 48h |
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| 血琼脂斜面(4°C) | 厌氧罐 | 1-2周(脆弱拟杆菌对氧气较敏感) |
| BHI+15%甘油(-70°C) | 冻存管厌氧分装 | 2年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
- 在厌氧工作站中快速操作——空气暴露<3min。
- 加入0.3-0.5mL预还原BHI肉汤——旋转重悬。
- 划线至厌氧血琼脂+BBE双平板——35-37°C厌氧培养48h。
- 复苏后验证:BBE上黑色菌落+卡那霉素/万古霉素耐受+触酶阳性——确认为脆弱拟杆菌。
⚠ 氧气敏感性:脆弱拟杆菌虽然具有超氧化物歧化酶(SOD)和一定程度的耐氧性——但在大气氧下存活时间<2h(显著短于产气荚膜梭菌的4-6h)。冻干粉开瓶后必须立即转入厌氧环境——不可在空气中放置>3min。
质控应用
CLSI M11 厌氧菌药敏质控
ATCC 25285 是 CLSI M11 指定的脆弱拟杆菌群药敏质控参考株——氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦、甲硝唑和克林霉素的药敏 QC 范围在 CLSI M11 中有明确规定。脆弱拟杆菌对甲硝唑的 MIC 折点(≤8 mg/L 敏感)是厌氧菌抗菌治疗的第一线药物选择依据。
25285对哌拉西林-他唑巴坦、氨苄西林-舒巴坦和头孢西丁的MIC QC范围与CLSI M11在各版本之间的差异较小(±1个稀释度)——说明该菌株的药敏表型在ATCC保藏中高度稳定——是厌氧菌药敏试验试剂盒批次QC的理想选择。
常见问题
Q: 25285 在血琼脂上生长缓慢——48h仍无菌落?
厌氧罐的氧气指示条是否变色?若刃天青仍为粉色——提示罐内氧气未被完全清除——脆弱拟杆菌对氧气敏感——在>1%氧气条件下生长延迟或完全不生长。重新加入新的厌氧产气袋——确认指示条变色(刃天青粉→无色、亚甲基蓝蓝→无色)后再放入培养。
Q: BBE上菌落不够黑色?
BBE中七叶苷被β-葡萄糖苷酶水解后产生的七叶亭——在Fe³⁺存在下形成黑色络合物。若BBE琼脂中柠檬酸铁铵浓度偏低(<0.5g/L)——络合反应不足——黑色减弱。含铁量检查:加入1滴饱和 FeCl₃ 至已接种的 BBE 平板表面——若菌落周围立即变为黑色——证实七叶苷已水解——原培养基中铁含量不足。
Q: 25285的甲硝唑耐药率上升了吗?
近年来全球监测数据显示脆弱拟杆菌群对甲硝唑的耐药率为1-5%,但nim基因(编码硝基咪唑还原酶——将甲硝唑还原为无活性的氨基衍生物)的携带率可达10-15%——提示潜在耐药威胁。若药敏试验显示甲硝唑 MIC > 8 mg/L——建议做nim基因PCR确证——并发送至参考实验室做甲硝唑耐药确证。
订购信息
| 产品名称 | 脆弱拟杆菌标准菌株 |
| 拉丁名 | Bacteroides fragilis |
| 保藏中心编号 | ATCC 25285 |
| 参考信息 | CLSI M11厌氧菌药敏QC株/卡那霉素万古霉素双耐受 |
| 产品形式 | 冻干粉(0代原装),附ATCC检测报告 |
| 存储条件 | 2-8°C避光保存 |
如需批量订购或技术咨询,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- CLSI M11: Methods for Antimicrobial Susceptibility Testing of Anaerobic Bacteria
- ATCC官网:B. fragilis 25285产品页与检测报告(COA)
- Wexler HM (2007): Bacteroides: the Good, the Bad, and the Nitty-Gritty — Clinical Microbiology Reviews
- Nagy E (2010): Anaerobic infections — update on treatment considerations — Drugs
- Brook I (2016): Spectrum and treatment of anaerobic infections — Journal of Infection and Chemotherapy
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