菌株来源与保藏信息
粪肠球菌 ATCC 29212(Enterococcus faecalis (Andrewes and Horder) Schleifer and Kilpper-Balz)是 CLSI M100 指定的肠球菌属药敏试验质控菌株。该菌株最初分离自临床尿液样本,对万古霉素敏感(VSE),不携带 vanA/vanB 耐药基因簇,对氨基糖苷类呈固有低水平耐药(无高水平氨基糖苷类耐药 HLAR 基因)。ATCC 29212 因其稳定的野生型耐药表型和快速生长特性,在肠球菌药敏质控中不可替代。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 29212 表现 |
| 革兰染色 | 阳性球菌,成对或短链排列 |
| 触酶 | 阴性(与葡萄球菌的关键区分) |
| PYR | 阳性(吡咯烷酮酶——粪肠球菌特征) |
| 胆汁七叶苷 | 阳性(肠球菌属特征) |
| 6.5% NaCl 生长 | 阳性(肠球菌属特征) |
| 万古霉素敏感型 | VSE(vanA/vanB 阴性) |
| HLAR | 阴性——庆大霉素 MIC 500 μg/mL 时不生长 |
| 溶血性 | 通常 γ 溶血(非溶血),部分批次弱 β |
| 最适温度 | 35±2°C |
粪肠球菌 ATCC 29212 是肠球菌属药敏试验的参考质控菌株——其核心特征是万古霉素敏感(VSE,vanA/vanB 阴性)且氨基糖苷类高水平耐药(HLAR)阴性。这意味着 29212 对万古霉素的 MIC 在 ≤4 μg/mL 范围内,且对庆大霉素 120 μg 和链霉素 300 μg 纸片均产生 ≥10mm 抑菌圈(HLAR 筛选阴性)。在实际临床微生物室中,29212 的 HLAR 阴性结果必须与高浓度庆大霉素(120μg)纸片的标准判读规则严格对照——若庆大霉素纸片出现 6mm(完全耐药)则是 HLAR 阳性菌株的预期结果(如 ATCC 51299),而 29212 应出现清晰的抑菌圈。粪肠球菌在血琼脂上为灰白色、圆形、α 或 γ 溶血的小菌落——与屎肠球菌在形态上无法区分——需通过阿拉伯糖发酵试验(29212 不发酵阿拉伯糖,区别于屎肠球菌)进行鉴别。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | TSA + 5% 羊血、MHA、BHI 琼脂 |
| 液体培养基 | BHI 肉汤、CAMHB(需补充 2.5–5% 裂解马血用于达托霉素等脂肽类) |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 18–24 h;药敏 16–20 h |
⚠ 达托霉素药敏提示:CLSI 要求达托霉素 MIC 测定时 CAMHB 必须补充钙离子至 50 mg/L(标准 CAMHB 的 Ca²⁺ 仅约 20–25 mg/L)。钙离子浓度不足会导致达托霉素 MIC 虚高(假耐药)——这是药敏实验室最常犯的错误之一。补充方法:向 1 L CAMHB 中加入无菌 CaCl₂ 储备液(终浓度 50 mg/L Ca²⁺),混匀后使用。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA 斜面(4°C) | 封口膜密封冷藏 | 1-2 个月 |
| TSB+15% 甘油(-70°C) | 冻存管,液氮速冻后转 -70°C | 2 年以上 |
| 冻干粉(4°C) | 原装密封西林瓶 | 见 ATCC 检测报告标注有效期 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL TSB,轻轻旋转重悬。
- 将菌悬液全部转移至 TSA 斜面或平板,35±2°C 孵育 18-24h。
- 复苏成功后挑取单菌落在 MHA 平板上划线——确认菌落形态和纯度。
- 取过夜培养的纯菌落配制 0.5 McFarland 菌悬液,接种 MHA 药敏平板——与 CLSI M100 中列出的 QC 范围核对,确认菌株对抗生素的 MIC 值在允许范围内,方可投入日常质控使用。
药敏质控应用
CLSI M100 指定质控范围
| 抗菌药物 | MIC(μg/mL) |
| 氨苄西林 | 0.5–2 |
| 万古霉素 | 1–4 |
| 达托霉素 | 1–8(需补充 50 mg/L Ca²⁺) |
| 利奈唑胺 | 1–4 |
| 高浓度庆大霉素 | 不生长(HLAR 阴性——500 μg/mL 筛选阴性) |
| 左氧氟沙星 | 0.5–2 |
高浓度庆大霉素筛选试验
ATCC 29212 的 HLAR 阴性表型使其在 500 μg/mL 庆大霉素筛选平板(BHI 琼脂 + 500 μg/mL 庆大霉素)上不生长——这是验证 HLAR 筛选方法的最关键质控。若 29212 在庆大霉素筛选平板上生长,说明庆大霉素浓度低于 500 μg/mL,需重配筛选平板。
常见问题
Q: 29212 和粪肠球菌 ATCC 51299(VRE 质控株)的区别?
ATCC 29212 = 万古霉素敏感株(VSE)——用于验证革兰阳性菌药敏方法的整体准确性。ATCC 51299 = 万古霉素耐药株(VRE,vanB 型)——专门用于验证万古霉素耐药筛选方法(如万古霉素 BHI 琼脂筛选平板)。两者互补:29212 确保方法不会"冤枉"敏感株,51299 确保方法不会"放过"耐药株。
Q: 为什么我的 29212 达托霉素 MIC 忽高忽低?
达托霉素 MIC 对 Ca²⁺ 浓度和培养基批号高度敏感。排查顺序:① 确认 CAMHB 已补钙至 50 mg/L;② 更换新批号 CAMHB(不同批号的 Ca²⁺ 可偏差 10–20%);③ 检查是否使用了同一批肉汤超过 7 天(Ca²⁺ 随时间从溶液中沉淀损失)。达托霉素质控波动是 CLSI 官方文件承认的已知难题——若排除上述因素后仍不稳定,建议换用新批号菌株。
Q: 29212 对万古霉素的 MIC 偏高了——是不是变成了 VRE?
先排除方法学误差。29212 对万古霉素的 CLSI QC 范围为 1-4 μg/mL。若 MIC 偏离至 8 μg/mL(VRE 临界值),首先检查培养基批号——部分品牌的 MHA 中磷酸盐浓度偏高可导致万古霉素 MIC 假性升高 1-2 个稀释度。重新配制一批 CAMHB(批号登记),使用大肠埃希菌 25922 和铜绿假单胞菌 27853 同时验证该批培养基的二价阳离子浓度合格后,再复测 29212。若多批次验证仍为 ≥8 μg/mL,将该菌株送至参考实验室做 vanA/vanB PCR 确证。
Q: 高浓度庆大霉素筛选试验 29212 应该产生多大抑菌圈?
29212 为 HLAR 阴性(庆大霉素 120μg 纸片应 ≥10mm,通常实际值为 16-22mm)。若庆大霉素 120μg 纸片出现 6mm(无抑菌圈),提示菌株已被 HLAR 阳性肠球菌污染——这在共用质控菌株的实验室中偶尔发生。应立即从冻存管重新复苏并验证纯度。
订购信息
| 产品名称 | 粪肠球菌标准菌株 ATCC 29212 |
| 拉丁名 | Enterococcus faecalis (Andrewes and Horder) Schleifer and Kilpper-Balz |
| 保藏中心编号 | ATCC 29212 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告(COA) |
| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M100 文件以及现行药典标准,仅供实验室专业人员参考。药敏试验结果受培养基品牌、接种量、孵育条件和判读方式等多种因素影响——不同实验室间的 MIC 值在 ±1 个二倍稀释度内的波动属于方法学可接受的变异范围。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Enterococcus faecalis 29212 产品页与检测报告(COA)
- CLSI M100:Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing,现行版本
- EUCAST:EUCAST clinical breakpoints,万古霉素 MIC 测定方法
- CLSI M07:Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests
- CLSI M02:Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests
- CLSI M100:高浓度庆大霉素和链霉素筛选试验标准