菌株来源与保藏信息
萎缩芽孢杆菌 ATCC 9372（Bacillus atrophaeus Nakamura，曾用名 Bacillus subtilis var. niger 和 Bacillus globigii）是 ATCC 保藏的一株经典产色素需氧芽孢杆菌，BSL-1。该菌株最初从土壤中分离，因其芽孢对环氧乙烷（EO）灭菌和干热灭菌具有极高的耐受性——D 值远高于 ATCC 6633——被全球标准指定为 EO 和干热灭菌生物指示剂（BI）的核心菌株。ATCC 9372 在营养琼脂上产生特征性深褐色至黑色色素（非黑色素——可能为铁载体相关色素），这一特征使其在菌落形态上极易与其他芽孢杆菌区分。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 9372 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阳性大杆菌 |
| 芽孢形态 | 椭圆、中生，芽孢囊不膨大 |
| 菌落色素 | 深褐色至黑色（区别于 ATCC 6633 的乳白色菌落） |
| 芽孢耐热性 | D₁₂₁≈2–3 min（远高于 ATCC 6633 的 0.5–1 min） |
| EO 耐受性 | D 值约 3–6 min（600 mg/L EO, 54°C, 60% RH） |
| 干热耐受性 | D₁₆₀≈1–3 min |
| 触酶 | 阳性 |
| 最适温度 | 30–37°C |
ATCC 9372 的芽孢耐热性约是 ATCC 6633 的 2–4 倍，对 EO 灭菌和干热灭菌的耐受性同样显著高于 6633。这种高耐受性使其成为工业灭菌验证的首选——只有能够有效灭活 ATCC 9372 芽孢的灭菌工艺才能被认定有效。
灭菌验证与生物指示剂
环氧乙烷（EO）灭菌生物指示剂
ATCC 9372 芽孢是全球EO 灭菌生物指示剂（BI）的核心菌株。典型 BI 制式为：每片滤纸载体含 10⁶ 个 ATCC 9372 芽孢，经 EO 灭菌循环后转入 TSB 中 37°C 培养 7 天——若肉汤保持澄清（无生长），证明灭菌循环有效灭活了 ≥ 10⁶ 芽孢（SAL ≤ 10⁻⁶）。ATCC 9372 的 EO D 值约为嗜热脂肪芽孢杆菌（ATCC 7953，蒸汽灭菌 BI 菌株）的 EO D 值的 2–3 倍——对 EO 的耐受性更强，因此被选为 EO 指示剂而非 7953。
干热灭菌验证
在干热灭菌（160–180°C）验证中，ATCC 9372 芽孢因其 D₁₆₀≈1–3 min 的中等耐热性，常被用作干热灭菌循环的验证菌株（在缺乏专用的干热 BI 菌株时）。
与相关菌株的分工
| 菌株 | 灭菌方式 | D 值特征 |
|---|
| ATCC 9372 | EO 灭菌、干热灭菌 | EO D≈3–6 min；D₁₂₁≈2–3 min |
| ATCC 7953（嗜热脂肪芽孢杆菌） | 蒸汽灭菌（121°C / 134°C） | D₁₂₁≈1.5–2 min——但对 EO 敏感 |
| ATCC 6633 | 消毒剂杀芽孢评价 | D₁₂₁≈0.5–1 min——蒸汽耐受性低，不可用于 BI |
常见问题
Q: 为什么 EO BI 不用 7953（嗜热脂肪芽孢杆菌）？
ATCC 7953 的芽孢对湿热（蒸汽）耐受性极强但对 EO 相对敏感——EO 的烷基化作用机制（作用于 DNA 鸟嘌呤 N7 位和蛋白质巯基）对嗜热脂肪芽孢杆菌的损伤远超对 9372。选择 EO BI 菌株的核心标准是对目标灭菌因子的耐受性最强——若对 EO 灭菌选用了 7953，其较低的 EO D 值会在低 EO 剂量下被轻易灭活，导致 BI 结果"假阴性"（实际灭菌不充分但 BI 显示通过）。
Q: 9372芽孢D121值偏高了怎么办？
D值偏高(>3min)通常提示芽孢形成条件不当——锰离子浓度不足(<5mg/L)或芽孢形成温度偏低(<30C)会导致芽孢皮层中DPA-Ca螯合物含量降低，反而需要更长的热暴露时间才能灭活(看似矛盾但实际是芽孢不均一性增加导致存活曲线拖尾)。优化方案：使用Schaeffer芽孢形成培养基(MnSO4 10mg/L)、37C培养72h以上、芽孢染色确认芽孢率>95%后再收获。
Q: 9372和6633的芽孢可以混合使用做双BI验证吗？
不推荐。两者的DEO值差异2-4倍——混合接种物无法区分"哪个芽孢在哪个暴露时间被灭活"。ISO 11138要求BI使用单一菌种制备——若需覆盖不同灭菌条件(EO vs 湿热vs干热)，应分别使用9372(EO)、7953(湿热)和9341(干热)独立接种物——不可混用。
Q: 9372芽孢D121值偏高了怎么办？
D值偏高(>3min)提示芽孢不均一性增加——锰离子不足或芽孢形成温度偏低导致芽孢皮层中DPA-Ca螯合物含量降低，反而需要更长热暴露灭活。优化：使用Schaeffer芽孢形成培养基(MnSO4 10mg/L)、37C培养72h以上、芽孢率>95%后再收获。
订购信息
| 产品名称 | 萎缩芽孢杆菌标准菌株 ATCC 9372 |
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| 拉丁名 | Bacillus atrophaeus Nakamura |
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| 保藏中心编号 | ATCC 9372 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告（COA） |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息及相关标准文件，仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
萎缩芽孢杆菌ATCC 9372（原名枯草芽孢杆菌黑色变种）——Nakamura(1989)基于DNA-DNA杂交将其从枯草芽孢杆菌中独立为新种Bacillus atrophaeus。其菌落产生深褐色至黑色色素（酪氨酸酶介导的黑色素合成途径），这是与枯草芽孢杆菌6633（乳白色/浅黄色菌落）的最直观形态鉴别点。9372的芽孢对环氧乙烷(EO)的耐受性在所有需氧芽孢杆菌中属于最高等级——DEO值（600mg/L EO, 54C, 50%RH）在3-5min范围，约为6633芽孢的2-4倍。在进行EO灭菌验证时，每批9372芽孢悬液制备后必须测定D121值（2-3min），若偏离此范围则该批不可用于BI验证。
培养条件与芽孢制备
营养期培养
| 参数 | 推荐条件 |
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| 固体培养基 | TSA, 营养琼脂(菌落深褐至黑色) |
| 液体培养基 | TSB, Schaeffer芽孢形成培养基 |
| 温度 | 30-37C |
| 培养时间 | 18-24h(营养期); 48-72h(芽孢>90%) |
芽孢悬液制备(BI用途)
- ATCC 9372接种锰盐琼脂，37C培养48-72h。
- 芽孢染色验证芽孢率>90%后用冷无菌水冲洗收集。
- 4C 10000xg离心10min洗涤3-4次。
- 65-70C水浴20min热休克灭活营养细胞并激活芽孢。
- 重悬于无菌水或40%乙醇(减少聚集)，分装-20C保存。
芽孢耐热性验证:每批芽孢悬液制备后须测定D121值(应2-3min)。若D<1.5min或>4min该批不可用于EO BI验证。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
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| TSA斜面(4C) | 封口膜密封冷藏 | 1-2个月 |
| TSB+15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年以上 |
| 冻干粉(4C) | 原装密封西林瓶 | 见ATCC检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入0.3-0.5mL TSB，轻轻旋转重悬。
- 转移至TSA斜面或平板，35+/-2C孵育18-24h。
- 复苏后挑取单菌落验证纯度，确认表型合格后投入使用。
参考资料
- ATCC官网：Bacillus atrophaeus 9372产品页与检测报告(COA)
- ISO 11135：环氧乙烷灭菌标准
- ISO 11138-2：环氧乙烷灭菌生物指示剂标准
- Nakamura LK (1989): Bacillus atrophaeus 分类学修订
- USP 55 Biological Indicators—Resistance Performance Tests
- Shintani H (2013): EO sterilization validation using B. atrophaeus spores
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