菌株来源与保藏信息
表皮葡萄球菌 ATCC 12228（Staphylococcus epidermidis (Winslow and Winslow) Evans）是 ATCC 保藏的一株凝固酶阴性葡萄球菌（CoNS）标准菌株，BSL-1。该菌株最初从健康人皮肤表面分离，是人体皮肤正常菌群的主要成员。与金黄色葡萄球菌的关键区别在于：ATCC 12228 不产凝固酶、不产溶血素（γ 溶血）、不发酵甘露醇（MSA 上不产黄色菌落），对新生霉素敏感。该菌株在化妆品微生物检验和消毒剂评价中承担凝固酶阴性葡萄球菌的代表角色。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 12228 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阳性球菌，四联或葡萄串状排列 |
| 凝固酶 | 阴性（试管法和玻片法均阴性——与金葡菌核心区分） |
| 溶血性 | γ 溶血（不溶血） |
| 甘露醇发酵 | 阴性（MSA 上红色或无色菌落——区别于金葡菌的黄色） |
| DNase | 阴性 |
| 新生霉素敏感 | 敏感（与腐生葡萄球菌的区分——腐生菌耐药） |
| 触酶 | 阳性（葡萄球菌属特征） |
ATCC 12228属于凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)——在TSA上与金葡菌形态相似(圆形凸起光滑乳白)，必须用试管法凝固酶试验确认为CoNS后方可用于实验。12228在MSA上应为红色菌落(不发酵甘露醇)——若出现黄色菌落提示金葡菌污染。其多糖胞间粘附素(PIA)使其在聚苯乙烯表面形成的生物膜比金葡菌更致密——存活菌数高1-2log。表皮葡萄球菌占健康人皮肤葡萄球菌群落的60-90%——比金葡菌更具生态代表性。
化妆品与消毒剂评价
化妆品微生物检验——凝固酶阴性葡萄球菌对照
在《化妆品安全技术规范》微生物检验方法中，金黄色葡萄球菌（ATCC 6538）为控制菌检查的金黄色葡萄球菌阳性对照。但在化妆品防腐挑战试验中，表皮葡萄球菌作为皮肤常驻菌群的代表往往比金黄色葡萄球菌更贴近真实暴露场景——化妆品主要施用于健康皮肤，接触的是 CoNS 而非金葡菌。部分日本和韩国的化妆品微生物标准已将 ATCC 12228 纳入补充测试菌株。
消毒剂评价——凝固酶阴性葡萄球菌的补充
在消毒剂效力评价中，ATCC 12228 可作为葡萄球菌属内多样性测试的补充菌株。表皮葡萄球菌的生物膜形成能力强于金黄色葡萄球菌（12228 在聚苯乙烯表面 37°C 48h 形成的生物膜厚度可超过 6538 的 2 倍），用于评价消毒剂对医疗器械表面葡萄球菌生物膜的清除效力时，12228 比 6538 更具挑战性。
订购信息
| 产品名称 | 表皮葡萄球菌标准菌株 ATCC 12228 |
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| 拉丁名 | Staphylococcus epidermidis (Winslow and Winslow) Evans |
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| 保藏中心编号 | ATCC 12228 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告（COA） |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息及相关标准文件，仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
ATCC 12228属于凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)——其菌落形态在TSA上与金葡菌非常相似（圆形、凸起、光滑、乳白色），必须用试管法凝固酶试验确认为CoNS后方可用于实验。12228在MSA上不发酵甘露醇——应为红色菌落（培养基颜色不变）——若出现黄色菌落提示金葡菌污染。12228产生的多糖胞间粘附素(PIA/poly-β-1,6-N-acetylglucosamine)使其在聚苯乙烯和聚氨酯表面形成比金葡菌更厚更致密的生物膜——12228生物膜中的存活菌数通常比6538生物膜高1-2log。而表皮葡萄球菌占健康人皮肤葡萄球菌群落的60-90%——比金葡菌更具生态代表性——日本和韩国化妆品防腐挑战指南已将CoNS列为补充测试菌株。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
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| 固体培养基 | TSA, 血琼脂, MSA |
| 液体培养基 | TSB, BHI |
| 温度 | 35+/-2C |
| 培养时间 | 18-24h; 48-72h(生物膜) |
质控提醒: ATCC 12228菌落形态与金葡菌非常相似，必须用凝固酶试验确认为CoNS后方可使用。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA斜面(4C) | 封口膜密封冷藏 | 1-2个月 |
| TSB+15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年以上 |
| 冻干粉(4C) | 原装密封西林瓶 | 见ATCC检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入0.3-0.5mL TSB，轻轻旋转重悬。
- 转移至TSA斜面或平板，35+/-2C孵育18-24h。
- 复苏后挑取单菌落验证纯度，确认表型合格后投入使用。
常见问题
Q: 12228在MSA上变色了
可能被金葡菌污染。ATCC 12228不发酵甘露醇应在MSA上为红色菌落。若出现黄色菌落应重新从冻干粉复苏。
Q: 生物膜形成试验OD值不高？
使用TSB+1% glucose补充促进PIA合成；微孔板用50%人血浆或纤维蛋白原预包被；延长培养至72h。
消毒剂评价与化妆品应用
葡萄球菌生物膜消毒效力
在医疗器械表面消毒剂载体试验(EN 13697, ASTM E2871)中，ATCC 12228作为凝固酶阴性葡萄球菌(CoNS)生物膜代表菌株具有独特价值。表皮葡萄球菌的多糖胞间粘附素(PIA)使聚苯乙烯和不锈钢表面生物膜比金葡菌更厚更致密。消毒剂接触时间试验中，12228生物膜存活菌数通常比6538(金葡菌)生物膜高1-2log——仅用6538验证的消毒剂可能低估CoNS生物膜保护效应，接触时间须以12228数据为准。
化妆品皮肤常驻菌群代表性
表皮葡萄球菌占健康人皮肤葡萄球菌群落的60-90%，比金黄色葡萄球菌更具生态代表性。日本药妆品工业协会和韩国食药安全部已在化妆品防腐挑战指南中将CoNS(以12228为代表)列为补充测试菌株。宣称维护皮肤微生态平衡的化妆品开发中，以12228补充6538进行防腐挑战更接近真实使用场景。
参考资料
- ATCC官网：Staphylococcus epidermidis 12228产品页与检测报告(COA)
- 化妆品安全技术规范2015年版：微生物检验方法
- EN 1040/EN 1276消毒剂定量悬浮试验标准
- Mack D et al. (1996): 表皮葡萄球菌生物膜形成机制与ica操纵子
- Otto M (2009): Staphylococcus epidermidis—the accidental pathogen
- ISO 11930化妆品微生物防腐保护评价
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