菌株来源与保藏信息
化脓性链球菌标准株 ATCC 12344(Streptococcus pyogenes)是 ATCC 保藏的经典 A 群 β-溶血性链球菌(GAS)参考株,BSL-2。12344 属于 Lancefield A 群——产生链球菌溶血素 O(SLO)和链球菌溶血素 S(SLS)——在血琼脂上形成宽大透明的 β 溶血环——是临床微生物实验室 β 溶血链球菌鉴别和药敏质控的常用参考株。12344 对杆菌肽(0.04 U 纸片)敏感(A 群特征——区别于 B/C/G 群链球菌)且 PYR 阳性(区别于其他 β 溶血链球菌)。ATCC 12344 以冻干粉(0 代原装)形式提供,附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供,适用于 β 溶血链球菌鉴别质控、杆菌肽敏感试验阳性质控及链球菌药敏试验。
生物学特性
| 特征 | ATCC 12344(GAS) |
| 革兰染色 | 阳性球菌——链状排列 |
| 溶血性 | β 溶血——宽大透明溶血环(SLO 氧稳定 + SLS 氧不稳定双溶血素) |
| Lancefield 分型 | A 群——细胞壁多糖抗原 |
| 杆菌肽敏感 | 敏感——0.04 U 纸片抑菌圈 ≥ 14 mm |
| PYR | 阳性(吡咯烷酮芳胺酶——肠球菌属也阳性——区别于其他 β 溶血链球菌) |
| 触酶 | 阴性(与葡萄球菌的关键区别) |
| CAMP 试验 | 阴性(区别于 B 群无乳链球菌——CAMP 阳性) |
| 青霉素 MIC | ≤ 0.03 mg/L——高度敏感(全球未发现青霉素耐药 GAS) |
ATCC 12344 的 SLO(氧不稳定——在琼脂表面因 O₂ 氧化而失活——深层溶血由 SLS 主导)和 SLS 协同产生深而宽的 β 溶血环。杆菌肽敏感试验是鉴别 A 群链球菌最简便的方法——但需注意:部分 C 群和 G 群链球菌也可能对杆菌肽敏感(假阳性率约 5~10%)——确认试验应以 Lancefield 凝集法(A 群特异性抗血清)为准。12344 对青霉素的 MIC < 0.03 mg/L——全球范围内尚未发现青霉素耐药 GAS——青霉素仍是化脓性链球菌感染的首选治疗药物。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
| 固体培养基 | 血琼脂(5% 脱纤维羊血)——TSA 不加血则生长较差 |
| 液体培养基 | TH 肉汤(Todd-Hewitt——链球菌增菌专用)、BHI 肉汤 |
| 温度 | 35 ± 2°C |
| CO₂ | 5% CO₂ 促进生长和溶血 |
| 培养时间 | 18~24 h |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3~0.5 mL TH 肉汤或 BHI 肉汤,轻轻旋转重悬。
- 转移至血琼脂平板,35 ± 2°C、5% CO₂ 孵育 18~24 h。
- 复苏后验证 β 溶血和杆菌肽敏感——确认 A 群链球菌表型后使用。
⚠ 培养关键:化脓性链球菌为苛养菌——在普通 TSA 上生长较差或不生长。必须在含血或血清的培养基上培养。血琼脂的羊血应为脱纤维羊血(非柠檬酸盐抗凝血——柠檬酸对链球菌生长有微弱抑制作用)——血浓度 5% 为常规选择——但若要观察深层溶血(SLS 主导)——可穿刺接种至琼脂深层。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| TSA斜面(4C) | 封口膜密封 | 1-2月 |
| TSB+15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年+ |
| 冻干粉(4C) | 原装密封 | 见ATCC检测报告 |
质控应用
CLSI M100 推荐的化脓性链球菌青霉素药敏质控株。ATCC 12344 用于验证血琼脂的溶血反应质量(β 溶血应为宽大透明环——若溶血环变窄或不透明——排查羊血批次是否更换或因储存过久导致红细胞脆性降低)。杆菌肽纸片(0.04 U 鉴别纸片——非 10 U 治疗纸片)以 12344 为阳性质控——抑菌圈应 ≥ 14 mm——并同时以 B 群链球菌(如 ATCC 13030——杆菌肽耐药)为阴性质控配对验证。
常见问题
Q: 12344 的杆菌肽敏感试验出现假阴性怎么办?
杆菌肽纸片受潮或过期是假阴性最常见原因。0.04 U 杆菌肽纸片应冷冻保存(-20°C)——2~8°C 保存超过 1 个月活性下降——导致抑菌圈缩小。若出现抑菌圈 < 14 mm(假阴性——提示非 A 群)——首先排查纸片批次和库存条件——同时用 Lancefield A 群凝集法确证。
Q: 12344 和 13030(无乳链球菌GBS)在血平板上能区分吗?
可以。12344(GAS)β 溶血环宽大透明且杆菌肽敏感——13030(GBS)β 溶血环较窄(约 1 mm)且杆菌肽耐药——最重要的是 CAMP 试验——13030 CAMP 阳性(Arrowhead 溶血增强)而 12344 CAMP 阴性。
Q: 12344的杆菌肽试验抑菌圈变小了是纸片失效吗?
杆菌肽纸片(0.04U鉴别纸片)应-20C保存——2-8C超过1个月活性衰减。若抑菌圈<14mm——优先排查纸片批次和储存温度。
订购信息
| 产品名称 | 化脓性链球菌标准株(A 群 β 溶血) |
| 拉丁名 | Streptococcus pyogenes |
| 保藏中心编号 | ATCC 12344 |
| 参考信息 | Lancefield A 群 / β 溶血 / 杆菌肽敏感 |
| 产品形式 | 冻干粉(0 代原装),附 ATCC 检测报告(COA),含批号信息 |
| 存储条件 | 2~8°C 避光保存 |
技术免责声明:本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息及相关标准文献,仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购,请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网:Streptococcus pyogenes 12344 产品页
- CLSI M100 SXT 药敏标准
- Spellerberg B, Brandt C (2015): Streptococcus — Manual of Clinical Microbiology
- CLSI M22: Quality Control for Commercially Prepared Microbiological Culture Media
- Ferretti JJ et al. (2016): Streptococcus pyogenes — Microbiol Spectrum
- CLSI M22: Culture Media QC
- Ferretti JJ et al. (2016): GAS — Microbiol Spectrum