菌株来源与保藏信息
肠炎沙门氏菌肠道亚种 ATCC 14028（Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium）是 ATCC 保藏的一株经典革兰阴性肠道致病菌标准菌株，BSL-2。该菌株最初从动物组织样本中分离（血清型 Typhimurium，抗原式 O:1,4,5,12; H:i:1,2），在食品微生物学、药品微生物限度检查和消毒剂效力评价中具有核心地位。ATCC 14028 是中国药典（ChP 1106）控制菌检查中沙门菌的指定阳性对照菌株，也是 EN 和 AOAC 消毒剂标准中的革兰阴性肠道菌代表。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。操作本菌株需在生物安全柜中进行，BSL-2 管理。
生物学特性
| 特征 | ATCC 14028 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阴性短杆菌 |
| 氧化酶 | 阴性 |
| TSI 反应 | 碱/酸，产 H₂S（黑色沉淀），产气 |
| 赖氨酸脱羧酶 | 阳性 |
| 尿素酶 | 阴性 |
| 吲哚 | 阴性 |
| 柠檬酸盐利用 | 阳性（Simmons 柠檬酸盐琼脂产蓝色） |
| 运动性 | 阳性（周鞭毛） |
| XLD 琼脂 | 红色菌落 + 黑色中心（H₂S 产生） |
| HE 琼脂 | 蓝绿色菌落 + 黑色中心 |
| 最适温度 | 35–37°C |
ATCC 14028 在 XLD 琼脂上产生特征性红色菌落带黑色中心——这是由于赖氨酸脱羧产碱（红色）和 H₂S 与铁盐反应生成硫化铁沉淀（黑色）的双重代谢特征。这一形态是该菌株纯度验证的最快方法。
肠炎沙门菌血清型鼠伤寒(ATCC 14028)属于沙门菌属B群——其O抗原为1,4,[5],12、H抗原为i相1,2。14028在XLD琼脂上产生典型的黑色中心菌落(H2S强阳性——区别于志贺菌属)、在HE琼脂上产生蓝绿色至蓝色菌落(H2S阳性)、在SS琼脂上产生无色半透明菌落(H2S阳性且中心黑色)。14028同时含有一个约94kb的毒力质粒(pSLT)——携带spv操纵子(spvRABCD)，在系统感染模型中与沙门菌的肝脾定植能力相关。该菌株为多位点序列分型(MLST)ST19型——是目前全球临床和食品沙门菌分离株中最常见的序列型之一，因此被选择作为消毒剂评价的代表性沙门菌株。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA、营养琼脂、XLD 琼脂（选择性/鉴别）、HE 琼脂、亚硫酸铋琼脂（BS） |
| 液体培养基 | TSB、亚硒酸盐胱氨酸肉汤（SCB，前增菌用）、四硫磺酸盐肉汤（TTB） |
| 温度 | 35–37°C |
| 培养时间 | 18–24 h（TSA 上典型菌落） |
⚠ BSL-2 操作提醒：ATCC 14028 属于生物安全等级 2（BSL-2），所有操作——包括冻干粉开启、传代培养、悬液制备——必须在生物安全柜中进行。操作后彻底洗手，工作台面用有效消毒剂（70% 乙醇或 1% 次氯酸钠）擦拭。废弃培养物必须经 121°C 高压灭菌 30 min 后方可丢弃。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA斜面(4C) | 封口膜密封冷藏 | 1-2个月 |
| TSB+15%甘油(-70C) | 冻存管液氮速冻 | 2年以上 |
| 冻干粉(4C) | 原装密封西林瓶 | 见ATCC检测报告 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入0.3-0.5mL TSB，轻轻旋转重悬。
- 将菌悬液全部转移至TSA斜面或平板，35+/-2C孵育18-24h。
- 复苏成功后挑取单菌落验证纯度和关键表型，确认合格后方可投入日常使用。
质控与标准化应用
药品控制菌检查——沙门菌阳性对照
在中国药典（ChP）通则 1106（非无菌产品微生物限度检查：控制菌检查法）和 USP <62> 中，沙门菌被列为口服制剂和特定原料的必检控制菌。ATCC 14028 作为沙门菌阳性对照菌株，用于验证整个检测流程的有效性：前增菌（TSB 或乳糖肉汤，35°C 24h）→ 选择性增菌（SCB 或 TTB）→ 选择性平板分离（XLD、HE、BS）→ 生化鉴定和血清学确认。若 ATCC 14028 的阳性对照在上述流程中未被成功检出，说明培养基批次、选择性试剂效价或培养条件存在问题。
消毒剂效力评价——肠道致病菌代表
在 EN 1276（食品/工业/家用消毒剂）和 EN 13727（医疗领域消毒剂）中，ATCC 14028 作为革兰阴性肠道致病菌代表被纳入标准菌株组合。沙门菌属的外膜结构与大肠埃希菌不同——其 LPS 的 O-抗原多糖链更长、脂质 A 酰化模式差异影响对阳离子消毒剂的渗透性。ATCC 14028 对有机酸（乙酸、柠檬酸）在低 pH 条件下的耐受性高于大肠埃希菌——这在食品工业消毒剂评价中是关键差异。
ATCC 14028 vs ATCC 13076 分工
ATCC 14028 = 鼠伤寒沙门菌血清型（Typhimurium），ATCC 13076 = 肠炎沙门菌血清型（Enteritidis）。两者同属沙门菌肠道亚种但血清型不同。药典控制菌检查中两者均为可接受的阳性对照菌株——14028 因 H₂S 产生更强（TSI 和 XLD 上黑色更明显），在教学和验证中更容易观察，因此被多数中国药企选用。
常见问题与注意事项
Q: XLD 上菌落是红色但没有黑色中心——是菌株退化了吗？
不一定。H₂S 产生受培养基硫代硫酸钠和铁盐浓度影响——不同品牌 XLD 的 H₂S 指示能力差异显著。先在 TSI 斜面上验证 H₂S 产生（穿刺线及斜面底部变黑）。若 TSI 也阴性，可能菌株传代 > 10 次发生自发性 H₂S 表型减弱——更换新支冻干粉复苏。
Q: 前增菌后用 SCB 还是 TTB？
ChP 推荐使用SCB（亚硒酸盐胱氨酸肉汤）作为沙门菌选择性增菌液。SCB 中亚硒酸盐对多数肠道菌（大肠、变形杆菌）有抑制作用但对沙门菌温和。若样品基质含铋盐或重金属残留，改用 TTB（含煌绿和胆盐，抑制力更强但可能对受损沙门菌也有轻度抑制）。两种增菌液同时使用可提高检出率。
Q: 血清学确证必须做到哪一步？
生化鉴定（API 20E 或 VITEK GN 卡）提示沙门菌属后，需用多价 O 抗血清（A-I 群）和多价 H 抗血清进行玻片凝集试验。ATCC 14028 的预期结果：O 多价和 O:4 单因子均凝集（属于 B 群），H:i 和 H:1,2 凝集。若仅生化鉴定而不做血清学，不属于药典要求的完整确证。
Q: 14028在XLD上没有H2S黑色中心——是不是菌株退化了？
不一定。XLD的H2S显色高度依赖于培养基新鲜度和配方中的硫代硫酸钠/柠檬酸铁铵浓度。若XLD在4C冷藏超过72h，硫代硫酸钠氧化降解导致H2S反应减弱。使用新鲜配制的XLD平板(24h内)；同时接种TSI穿刺——若TSI底层产酸变黑而XLD仍无H2S，则可排除菌株退化问题。
Q: 14028和13076在消毒剂评价中可以互换吗？
不可以。虽然两者均为革兰阴性肠道致病菌，14028对酸性消毒剂的耐受性与13076有显著差异——志贺菌的耐酸系统(Gad谷氨酸脱羧酶系统)使其在pH 2.5-3.5环境下存活率比沙门菌高1-2log。含有机酸的消毒剂应分别验证对两株菌的效力。
订购信息
| 产品名称 | 肠炎沙门菌标准菌株 ATCC 14028 |
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| 拉丁名 | Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium |
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| 保藏中心编号 | ATCC 14028 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告（COA） |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息、CLSI文件及现行药典标准，仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC官网：Salmonella enterica 14028产品页与检测报告(COA)
- 中国药典(ChP)2020年版：通则1105、1106微生物限度检查
- GB 4789.4食品安全国家标准沙门氏菌检验
- EN 1040/EN 1276消毒剂定量悬浮试验标准
- USP 51 Antimicrobial Effectiveness Testing
- McClelland M et al. (2001): Complete genome sequence of S. enterica serovar Typhimurium LT2
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