菌株来源与保藏信息
肺炎克雷伯菌 ATCC 700603（Klebsiella pneumoniae (Schroeter) Trevisan）是 CLSI M100 指定的产超广谱 β-内酰胺酶（ESBL）质控菌株。该菌株携带 blaSHV-18 基因（SHV 型 ESBL），对头孢他啶、头孢噻肟、氨曲南等三代头孢菌素和单环内酰胺类耐药，但耐药表型被克拉维酸抑制。ATCC 700603 在临床微生物实验室中承担双重角色：ESBL 表型确证试验的阳性质控株，以及验证每批头孢他啶-克拉维酸和头孢噻肟-克拉维酸复合纸片/MIC 板的性能。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 700603 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阴性短杆菌，明显荚膜 |
| 氧化酶 | 阴性 |
| 吲哚 | 阴性 |
| MR-VP | MR 阴性 / VP 阳性 |
| 柠檬酸盐利用 | 阳性 |
| 运动性 | 阴性（与大肠埃希菌的关键区分） |
| 尿素酶 | 阳性（区别于多数肠杆菌） |
| ESBL | SHV-18 型——阳性，被克拉维酸抑制 |
| 拉丝试验 | 阳性（高粘液型菌落，挑取时拉丝 > 5 mm） |
| 最适温度 | 35±2°C |
在 MacConkey 琼脂上 35°C 24h 形成直径 3–5 mm 的粉红色、极度粘稠、拉丝状菌落——肺炎克雷伯菌的荚膜多糖（K 抗原）使其在固体培养基上呈现特征性高粘液表型，可用接种环拉丝试验（阳性 > 5 mm）作为快速辅助鉴定。
ESBL 表型确证试验
CLSI 推荐的 ESBL 确证流程
ATCC 700603 的质量控制核心在于验证ESBL 表型确证试验的有效性。CLSI 推荐纸片扩散法和 MIC 法的确证标准如下：用头孢他啶（CAZ，30 μg）和头孢他啶-克拉维酸（CAZ/CLA，30/10 μg）复合纸片分别测试，若加克拉维酸后抑菌圈直径增加 ≥ 5 mm，则产 ESBL。ATCC 700603 作为阳性质控株，必须呈现 ≥ 5 mm 的抑菌圈增量——若增量 < 5 mm，说明克拉维酸纸片或复合 MIC 板失效。
| 抗菌药物 | 纸片法抑菌圈（mm） | 单独 MIC（μg/mL） |
|---|
| 头孢他啶 | 10–18（耐药） | 16–128 |
| 头孢他啶-克拉维酸 | ≥ 比单独 ≥ 5 mm 增量 | ≤ 1（克拉维酸恢复敏感性） |
| 头孢噻肟 | 17–25（中介至耐药） | 2–64 |
| 头孢噻肟-克拉维酸 | ≥ 比单独 ≥ 5 mm 增量 | ≤ 1 |
ATCC 700603 vs ATCC 25922 配合使用
完整的 ESBL 确证试验每日质控需要三株菌同时测试：
| 菌株 | ESBL 表型 | 质控角色 |
|---|
| ATCC 25922 | 阴性（野生型） | 验证克拉维酸不会在非 ESBL 菌株上产生 ≥ 5 mm 增量（阴性对照） |
| ATCC 700603 | 阳性（SHV-18） | 验证方法能正确检出 ESBL（阳性对照） |
| 肺炎克雷伯菌 ATCC BAA-2146 | KPC 碳青霉烯酶 | 验证改良 Hodge 试验/mCIM（碳青霉烯酶确证）的阳性质控 |
常见问题
Q: 700603 的 ESBL 表型丢失了怎么办？
ATCC 700603 的 blaSHV-18 基因位于染色体上，理论上比质粒编码的 ESBL 更稳定，但在连续传代 > 15–20 次后确实可能出现自发性 ESBL 表型减弱（启动子区域突变导致表达降低）。解决方案：从 -70°C 冻存管开启新一支，限制传代次数 < 5 次。切勿依赖已传代 > 10 次的菌株做 ESBL 确证质控。
Q: 克拉维酸增量达不到 5 mm 怎么办？
排查：① 克拉维酸纸片是否过期（克拉维酸在室温下 2 周降解 50%）；② MHA 是否含过多胸腺嘧啶（胸腺嘧啶拮抗 SMX-TMP 但不影响 β-内酰胺类，但部分批号的半合成 MHA 质量差异影响克拉维酸扩散）；③ 菌株是否为 700603（而非 700603 的传代变异株）。若以上排除后仍不达标，更换新批号 ATCC 700603。
Q: 700603 的 ESBL 表型丢失了怎么办？
SHV-18 基因的表达受染色体启动子调控——在含头孢菌素的选择性培养基上传代可能通过启动子区域突变（IS 元件插入或点突变）导致 SHV-18 表达下调或沉默，表现为 ESBL 表型减弱甚至消失。解决：① 从冻干粉重新复苏——在 TSA（非选择性）上传代 1-2 次，将 ESBL 表型恢复；② 在 ESBL 质控记录中注明该菌株的表型稳定性检查频率（建议每月验证一次）。
订购信息
| 产品名称 | 肺炎克雷伯菌 ATCC 700603（ESBL 阳性质控） |
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| 拉丁名 | Klebsiella pneumoniae (Schroeter) Trevisan |
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| 保藏中心编号 | ATCC 700603 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告（COA） |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M100 文件以及现行药典标准，仅供实验室专业人员参考。药敏试验结果受培养基品牌、接种量、孵育条件和判读方式等多种因素影响——不同实验室间的 MIC 值在 ±1 个二倍稀释度内的波动属于方法学可接受的变异范围。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
ATCC 700603 的 ESBL 表型由 blaSHV-18 基因编码——这是 SHV-1 的 G238S+E240K 双突变体，属于 Ambler 分类 A 类丝氨酸 β-内酰胺酶。SHV-18 可水解头孢他啶和氨曲南（但对头孢噻肟的水解效率较低——这是 SHV 型 ESBL 与 CTX-M 型 ESBL 的重要表型区别）。在 ESBL 确证试验中，头孢他啶（30μg）与头孢他啶-克拉维酸（30/10μg）组合的抑菌圈直径差值应 ≥5mm——若差值 <5mm，首先检查克拉维酸纸片是否过期（克拉维酸在室温下稳定性差，建议 -20°C 保存并在开瓶后 1 周内使用完毕）。700603 同时可作为 AmpC β-内酰胺酶阴性质控——在头孢西丁纸片试验中，700603 不产生 AmpC，因此头孢西丁的抑菌圈直径在 CLSI 敏感范围内。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA、MacConkey 琼脂（纯度验证，粉红色粘稠菌落）、MHA（药敏试验） |
| 液体培养基 | TSB、CAMHB |
| 温度 | 35:1:2:1:C |
| 培养时间 | 18:24 h |
质控关键：700603 的 SHV-18 酶表达在非选择性培养基（TSA）上最稳定。勿在含头孢菌素的选择性培养基上传代，抗生素压力可能导致 blaSHV-18 启动子区域突变（上调或下调），改变 ESBL 表型强度，影响质控结果。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA 斜面（4°C） | 封口膜密封冷藏 | 1-2 个月 |
| TSB+15% 甘油（-70°C） | 冻存管，液氮速冻后转 -70°C | 2 年以上 |
| 冻干粉（4°C） | 原装密封西林瓶 | 见 ATCC 检测报告标注有效期 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL TSB，轻轻旋转重悬。
- 将菌悬液全部转移至 TSA 斜面或平板，35±2°C 孵育 18-24h。
- 复苏成功后取单菌落在 TSA（非选择性）上划线——验证纯度。
- 关键步骤：取纯培养菌落进行头孢他啶和头孢他啶-克拉维酸纸片协同试验——确认 ESBL 表型未丢失（头孢他啶-克拉维酸抑菌圈比头孢他啶单药 ≥5mm）。若差值 <3mm 提示 blaSHV-18 可能发生启动子突变——应从冻干粉重新复苏并送 PCR 验证。
参考资料
- CLSI M100: Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing，现行版本
- ATCC 官网：Klebsiella pneumoniae 700603 产品页
- Rasheed JK et al. (2000): SHV-18 型 ESBL 在肺炎克雷伯菌中的分子特征
参考资料
- ATCC 官网：Klebsiella pneumoniae 700603 产品页
- CLSI M100：Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing，现行版本
- Rasheed JK et al. (2000): SHV-18 型 ESBL 在肺炎克雷伯菌中的分子特征
- EUCAST：EUCAST guidelines for detection of resistance mechanisms
- CLSI M07：Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests
- Bradford PA (2001): Extended-spectrum β-lactamases in the 21st century
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