菌株来源与保藏信息
大肠埃希菌 ATCC 35218（Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers）是 CLSI M100 指定的 β-内酰胺酶阳性（TEM-1 型）质控菌株。该菌株携带质粒编码的 blaTEM-1 基因，产生 TEM-1 型广谱 β-内酰胺酶，能水解氨苄西林、阿莫西林等青霉素类药物，但不水解 β-内酰胺酶抑制剂（克拉维酸、舒巴坦、他唑巴坦）且不产 ESBL。ATCC 35218 的核心用途是与产生酶抑制剂组合的药物（如阿莫西林-克拉维酸、氨苄西林-舒巴坦、哌拉西林-他唑巴坦）联合测试——验证 β-内酰胺酶抑制剂能够有效抑制 TEM-1 型 β-内酰胺酶。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 35218 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阴性短杆菌 |
| β-内酰胺酶 | TEM-1 型（广谱酶）——阳性 |
| ESBL | 阴性（TEM-1 不水解三代头孢菌素） |
| 氨苄西林 MIC | > 128 μg/mL（高度耐药——TEM-1 水解） |
| 氨苄西林-舒巴坦 MIC | ≤ 8/4 μg/mL（舒巴坦恢复敏感性） |
| 扩增碳青霉烯酶 | 阴性 |
| 菌落特征 | 标准大肠菌——MacConkey 上粉红色、EMB 上金属绿色 |
ATCC 35218的核心特征是其质粒携带的blaTEM-1基因——编码广谱TEM-1β-内酰胺酶(Ambler A类)，可水解氨苄西林和羧苄西林，但对克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦敏感。35218在氨苄西林单药中应为耐药而阿莫西林-克拉维酸组合为敏感——这种耐药→敏感的转变是TEM-1存在的间接证据。在酶抑制剂组合药的QC中用于验证他唑巴坦和克拉维酸的酶抑制活性。
β-内酰胺/酶抑制剂组合质控
核心质控逻辑
ATCC 35218 的质控价值在于验证β-内酰胺酶抑制剂组分是否有效。以阿莫西林-克拉维酸（AMC）为例：单独阿莫西林对 TEM-1 敏感（MIC 4–16 μg/mL），加克拉维酸后 MIC 应降至 ≤ 8/4 μg/mL。若 AMC 纸片的抑菌圈正常而单独氨苄西林的抑菌圈也正常（即 35218 对氨苄西林耐药的表型未表达），说明菌株 TEM-1 酶表达可能被抑制或丢失——需更换新批号。
CLSI 指定质控范围
| 抗菌药物 | 纸片法抑菌圈（mm） | MIC（μg/mL） |
|---|
| 氨苄西林 | —（耐药，无抑制圈） | > 16 |
| 氨苄西林-舒巴坦 | 14–20 | 2/1–8/4 |
| 阿莫西林-克拉维酸 | 18–24 | 2/1–8/4 |
| 哌拉西林-他唑巴坦 | 24–30 | 1/4–4/4 |
| 替卡西林-克拉维酸 | 23–29 | 4/2–16/2 |
与 ATCC 25922 和 ATCC 700603 的协同使用
| 菌株 | β-内酰胺酶表型 | 质控用途 |
|---|
| ATCC 25922 | 无酶（野生型敏感） | 基本药敏质控 |
| ATCC 35218 | TEM-1 阳性（非 ESBL） | 验证酶抑制剂组合纸片——酶抑制剂有效否 |
| ATCC 700603 | ESBL 阳性（SHV-18） | 验证 ESBL 确证试验——克拉维酸增量法 |
三株菌互补：25922 保证方法不"冤枉"敏感株，35218 保证酶抑制剂效价正常，700603 保证 ESBL 检出能力。
常见问题
Q: 35218 的氨苄西林纸片突然出现了抑菌圈？
说明 TEM-1 酶表达可能被抑制或质粒丢失。TEM-1 位于质粒上——在非选择性培养基上传代 > 10 次后质粒可能自然丢失（curing）导致菌株恢复对氨苄西林敏感。若氨苄西林纸片出现 > 15 mm 的抑菌圈，该菌株已退化——不可继续用于酶抑制素质控，需更换新支冻干粉。
Q: TEM-1 和 ESBL 有什么区别？为什么 35218 不是 ESBL 阳性？
TEM-1 是广谱 β-内酰胺酶（水解青霉素类和一代头孢菌素，不水解三代头孢菌素和单环内酰胺类），ESBL 是超广谱 β-内酰胺酶（可水解三代头孢菌素和氨曲南）。35218 只产 TEM-1 不产 ESBL——所以它对头孢他啶和头孢噻肟仍敏感。若把 35218 当作 ESBL 阳性质控使用，会出现假阴性（无法检测到 ESBL 确证试验的克拉维酸增效）。
Q: 35218的TEM-1酶活性丢失了怎么办？
blaTEM-1位于质粒——在非选择性培养基(TSA)上传代超过10代后，质粒可能通过curing机制自然丢失，菌株恢复对氨苄西林敏感。每次使用前在含氨苄西林(50μg/mL)的平板上划线验证耐药表型。若24h后出现抑菌圈——说明blaTEM-1已丢失——应从-70C冻存管重新复苏。
Q: 35218可以代替25922用于常规药敏QC吗？
不可以。35218携带TEM-1β-内酰胺酶，对氨苄西林和羧苄西林耐药——这与25922的全敏感谱不同。CLSI M100中两者的QC范围是分别建立的——35218仅在β-内酰胺/酶抑制剂组合药的QC中使用。若混用将导致氨苄西林和一代头孢菌素的结果无法引用CLSI标准判断。
订购信息
| 产品名称 | 大肠埃希菌 ATCC 35218（TEM-1 β-内酰胺酶阳性质控） |
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| 拉丁名 | Escherichia coli (Migula) Castellani and Chalmers |
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| 保藏中心编号 | ATCC 35218 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告（COA） |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的ATCC官方产品信息、CLSI文件及现行药典标准，仅供实验室专业人员参考。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
ATCC 35218的核心特征是其质粒携带的blaTEM-1基因——编码广谱TEM-1β-内酰胺酶(Ambler A类丝氨酸β-内酰胺酶)，可水解氨苄西林和羧苄西林，但对克拉维酸、舒巴坦和他唑巴坦敏感。因此35218在氨苄西林单药纸片试验中应为耐药(≤13mm)，而在阿莫西林-克拉维酸组合中表现为敏感(≥18mm)——这种"耐药→敏感"的转变是TEM-1存在的间接证据。在酶抑制剂药敏组合的QC中，35218用于验证他唑巴坦和克拉维酸在纸片法和MIC法中的酶抑制活性——若他唑巴坦组合的MIC偏高(≥16/4μg/mL)，可能提示该批次纸片或E-test条中酶抑制剂含量不足。
培养条件与保藏
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA, MacConkey, MHA |
| 液体培养基 | TSB, CAMHB |
| 温度 | 35+/-2C |
| 培养时间 | 18-24h |
质控关键: ATCC 35218 blaTEM-1位于质粒，非选择性培养基传代超过10代后质粒可能自然丢失。每次使用前在含氨苄西林(50 ug/mL)平板上划线验证耐药表型。若出现抑菌圈则该菌株已退化。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 期限 |
|---|
| TSA斜面4C | 封口膜密封 | 1-2月 |
| TSB+15%甘油-70C | 液氮速冻 | 2年+ |
| 冻干粉4C | 原装密封 | 见COA |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入0.3-0.5mL TSB，轻轻旋转重悬。
- 转移至TSA平板，35+/-2C孵育18-24h。
- 复苏后挑取单菌落——在含氨苄西林(50ug/mL)平板上划线验证TEM-1未丢失，确认耐药表型后投入使用。
参考资料
- ATCC官网：Escherichia coli 35218产品页与检测报告(COA)
- CLSI M100：Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing，现行版本
- EUCAST：β-内酰胺/酶抑制剂组合药敏试验方法
- CLSI M07：Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests
- Bush K & Jacoby GA (2010): Updated functional classification of β-lactamases
- Bradford PA (2001): Extended-spectrum β-lactamases in the 21st century
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