菌株来源与保藏信息
肺炎链球菌 ATCC 49619（Streptococcus pneumoniae (Klein) Chester）是 CLSI M100 指定的苛养菌药敏试验质控菌株，也是全球临床微生物实验室中使用最频繁的链球菌属质控株。该菌株于 1990 年代从临床呼吸道样本中分离，经 CDC 和 CLSI 多中心验证后纳入 M100 标准。ATCC 49619 对青霉素中度敏感（非耐药株），对红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、万古霉素的 MIC 值稳定在窄范围内，使其成为苛养菌药敏试验的理想质控株。
杭州康氧以 ATCC 原装 0 代冻干粉形式提供，附 ATCC 检测报告（COA），含批号信息。
生物学特性
| 特征 | ATCC 49619 表现 |
|---|
| 革兰染色 | 阳性双球菌，矛头状，成对排列 |
| 触酶 | 阴性（与葡萄球菌的关键区分） |
| 胆汁溶菌试验 | 阳性（10% 脱氧胆酸钠中 37°C 30 min 溶解） |
| 奥普托欣敏感 | 敏感（5 μg 纸片抑菌圈 ≥ 14 mm） |
| 溶血性 | α 溶血（草绿色溶血环） |
| 荚膜 | 有（但此株在体外培养中荚膜表达不稳定） |
| 青霉素 MIC | 0.06–0.25 μg/mL（中度敏感标准） |
| CO₂ 需求 | 需要 5% CO₂——苛养菌培养的强制要求 |
| 最适温度 | 35±2°C |
血琼脂上 35°C、5% CO₂ 培养 18–24h 形成直径 1–2 mm 的扁平、中央凹陷（脐状）的 α 溶血菌落。延长培养至 48h 菌落中央自体溶解（autolysis）形成凹陷加深——这是肺炎链球菌区别于其他 α 溶血链球菌的关键形态特征。
肺炎链球菌 ATCC 49619 属于苛养菌——其在 MHA 上的生长严格依赖血液或血清补充（5% 脱纤维羊血 MHA 是最常用的药敏试验基础培养基）。49619 为 optochin 敏感（>14mm）和胆汁溶菌阳性——这两项试验是区别肺炎链球菌和草绿色链球菌群的金标准。在 5% CO₂ 环境下，49619 的 α 溶血环呈草绿色（部分溶血）——与化脓链球菌的 β 溶血（完全溶血）形成鲜明对比。49619 对青霉素的敏感范围（CLSI M100）在纸片扩散法（1μg 苯唑西林替代）和 MIC 法之间存在一定差异——原因是 CO₂ 孵育对培养基 pH 的酸化和对 PBP 蛋白亲和力的影响程度不同。CLSI 推荐：若 1μg 苯唑西林纸片抑菌圈 ≥20mm，可直接报告青霉素敏感；若 <20mm，须用 MIC 法（肉汤稀释或 E-test）确证——不可仅凭纸片结果报告耐药。
苛养菌特殊培养要求
| 参数 | 推荐条件 |
|---|
| 固体培养基 | TSA + 5% 羊血、哥伦比亚血琼脂。药敏试验使用 MHA + 5% 裂解马血（或羊血） |
| 液体培养基 | CAMHB + 2.5–5% 裂解马血（LHB，lysed horse blood）——苛养菌药敏的强制添加物 |
| 气体环境 | 5% CO₂（烛罐或 CO₂ 培养箱） |
| 温度 | 35±2°C |
| 培养时间 | 18–24 h（药敏试验须在 20–24h 读取） |
⚠ 苛养菌药敏关键：肺炎链球菌在 MHA 上不加血不生长。裂解马血是 CLSI 指定添加物——羊血中的嗜血杆菌因子和 NADase 会干扰某些抗菌药物活性。CO₂ 环境会影响大环内酯类（红霉素、阿奇霉素）和克林霉素的 MIC——CO₂ 降低培养基表面 pH → 抑制大环内酯类抗菌活性 → MIC 偏高一至两个稀释度。读数时需注意 CO₂ 的影响，报告时以 CLSI 规定的 CO₂ 环境下范围为准。
保藏条件
| 保藏方式 | 条件 | 存活期限 |
|---|
| TSA 斜面（4°C） | 封口膜密封冷藏 | 1-2 个月 |
| TSB+15% 甘油（-70°C） | 冻存管，液氮速冻后转 -70°C | 2 年以上 |
| 冻干粉（4°C） | 原装密封西林瓶 | 见 ATCC 检测报告标注有效期 |
冻干粉复苏步骤
- 在生物安全柜中开启冻干粉西林瓶。
- 用无菌注射器加入 0.3-0.5 mL TSB（含 5% 脱纤维羊血或 0.1% 酵母提取物——肺炎链球菌在无血 TSB 中生长极差）。
- 将菌悬液全部转移至 5% 羊血 TSA 平板，35±2°C、5% CO₂ 孵育 18-24h。
- 复苏成功后挑取单菌落——验证 optochin 敏感性（>14mm）和胆汁溶菌试验（阳性）。
- 取纯菌落配制 0.5 McFarland 菌悬液——注意肺炎链球菌在盐水中 30min 内自溶，应在 15min 内完成接种。
- 接种 5% 羊血 MHA 药敏平板，35±2°C、5% CO₂ 孵育 20-24h——与 CLSI M100 QC 范围核对。
苛养菌药敏质控
CLSI M100 指定质控范围
| 抗菌药物 | MIC（μg/mL） |
|---|
| 青霉素 | 0.06–0.25 |
| 头孢曲松 | 0.015–0.06 |
| 红霉素 | 0.03–0.25 |
| 左氧氟沙星 | 0.5–2 |
| 万古霉素 | 0.12–0.5 |
| SXT（TMP/SMX） | 0.12/2.4–1/19 |
| 克林霉素 | 0.015–0.12 |
常见问题
Q: 为什么我的 49619 在普通 MHA 上不长？
肺炎链球菌是苛养菌——MHA 必须添加 5% 裂解马血（或羊血）。普通 MHA 不含血液成分，49619 无法生长。这是苛养菌药敏试验中最基本的操作错误。
Q: 红霉素 MIC 在 CO₂ 环境下持续偏高？
正常现象。CO₂ 降低琼脂表面 pH → 大环内酯类（红霉素、克拉霉素、阿奇霉素）质子化增加 → 穿透细菌细胞膜减少 → MIC 偏高一至两个稀释度。CLSI 的质控范围已考虑 CO₂ 影响——只要 MIC 落在规定范围内即合格，无需调整 CO₂ 或环境。
Q: 49619 为什么不长？
肺炎链球菌在普通 TSA 或无血 MHA 上几乎不生长——这是苛养菌的定义特征。确认使用了 5% 脱纤维羊血 TSA 或哥伦比亚血琼脂。若含血培养基上仍无生长，检查：① 冻干粉是否加入了足够体积的复溶液（0.5mL 以上）；② CO₂ 培养箱的实测 CO₂ 浓度——肺炎链球菌在 <3% CO₂ 中生长显著减缓；③ 羊血批次——某些品牌的商业化血琼脂中抗生素残留可抑制苛养菌。
Q: 49619 对苯唑西林纸片的抑菌圈偏小了怎么办？
首先检查孵育环境的 CO₂ 浓度——过高 CO₂（>7%）可酸化培养基表面 pH，导致苯唑西林活性被部分中和——这会影响 PBP2x 蛋白与苯唑西林的结合亲和力，使抑菌圈缩小 2-4mm。将 CO₂ 精确控制在 5%，使用 CO₂ 监测仪（而非仅凭培养箱面板显示）验证。若在标准 CO₂ 下仍 ≤19mm——该菌株可能已污染或传代过多——应从冻干粉重新复苏。
订购信息
| 产品名称 | 肺炎链球菌标准菌株 ATCC 49619 |
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| 拉丁名 | Streptococcus pneumoniae (Klein) Chester |
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| 保藏中心编号 | ATCC 49619 |
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| 产品形式 | 冻干粉（0 代原装），附 ATCC 检测报告（COA） |
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| 供应商 | 杭州康氧医疗器械有限公司 |
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技术免责声明：本文技术参数来源于公开发表的 ATCC 官方产品信息、CLSI M100 文件以及现行药典标准，仅供实验室专业人员参考。药敏试验结果受培养基品牌、接种量、孵育条件和判读方式等多种因素影响——不同实验室间的 MIC 值在 ±1 个二倍稀释度内的波动属于方法学可接受的变异范围。杭州康氧医疗器械有限公司对因使用本文信息产生的任何后果不承担责任。如需技术咨询或产品订购，请联系杭州康氧医疗器械有限公司。
参考资料
- ATCC 官网：Streptococcus pneumoniae 49619 产品页与检测报告（COA）
- CLSI M100：Performance Standards for Antimicrobial Susceptibility Testing，现行版本
- EUCAST：EUCAST clinical breakpoints，苛养菌药敏试验方法
- CLSI M07：Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests
- CLSI M02：Performance Standards for Antimicrobial Disk Susceptibility Tests
- FDA-CDER：Antibacterial Susceptibility Test Interpretive Criteria
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